（一）电解质
抗原与抗体发生结合后，由亲水胶体变为疏水胶体的过程中，须有电解质参与才能进一步使抗原抗体复合物表面失去电荷，水化层破坏，复合物相互靠拢聚集形成大块的凝集或沉淀。医学|教育网搜集整理若无电解质参加，则不出现可见反应。为了促使沉淀物或凝集物的形成，常用0.85%～0.9%（人、畜）或8%～10%（禽）的氯化钠或各种缓冲液（免疫标记技术）作为抗原和抗体的稀释液或反应液。但电解质的浓度不宜过高，否则会出现盐析现象。
（二）温度
在一定温度范围内，温度越高，抗原、抗体分子运动速度越快，这可以增加其碰撞的机会，加速抗原抗体结合和反应现象的出现，如凝集和沉淀反应通常在37℃水浴感作（即将试验材料加盖保湿恒温作用）一定时间医学|教育网搜集整理，以促进反应现象的出现，若用56℃水浴则反应更快。但有的抗原抗体结合则需长时间在低温下，才能使反应完成的比较充分、彻底，如有的补体结合试验在0℃～4℃冰箱结合效果更好。
（三）酸碱度
血清学试验要求在一定的pH下进行，常用的pH值为6～8，过高或过低，均可使已结合的抗原抗体复合物重新解离。若pH降至抗原或抗体的等电点时，会发生非特异性的酸凝集，造成假象。
（四）振荡
适当的机械振荡能增加分子或颗粒间的相互碰撞，加速抗原抗体的结合反应，但强烈的振荡可使抗原抗体复合物解离。
（五）杂质和异物
试验介质中如有与反应无关的杂质、异物（如蛋白质、类脂质、多糖等物质）存在时，医学|教育网搜集整理会抑制反应的进行或引起非特异性反应，故每批血清学试验都应设阳性对照和阴性对照试验。
