医学教育网临床医学检验主管技师：《答疑周刊》2015年07期
【问题】化学发光免疫分析的类型及原理？
化学发光免疫分析(chemiluminescenceimmunoassay,CLIA)，是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。
1化学发光免疫分析原理
化学发光免疫分析包含两个部分,即免疫反应系统和化学发光分析系统。化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化,形成一个激发态的中间体,当这种激发态中间体回到稳定的基态时,同时发射出光子(hM),利用发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统是将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体)直接标记在抗原(化学发光免疫分析)或抗体(免疫化学发光分析)上,或酶作用于发光底物。
2化学发光免疫分析的类型
化学发光免疫分析法以标记方法的不同而分为两种:
(1)化学发光标记免疫分析法。
(2)酶标记、以化学发光底物作信号试剂的化学发光酶免疫分析法。
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【问题】Coombs试验的配血原理是什么？
凡Coombs试验即抗人球蛋白试验，是检测血液中温反应性抗体的一种方法，也是诊断自身免疫性溶血性贫血的重要指标。温抗体中50%以上由IgG介导，其次为IgM，IgA和C3d等，因此本试验应分选各种单克隆抗体同时测定。Coombs试验分为直接试验（直接反应）和间接试验（间接反应）：直接试验的目的是检查红细胞表面的不完全抗体；间接试验的目的是检查血清中存在游离的不完全抗体。
（1）直接coombs试验用于检测已粘附在红细胞表面的不完全抗体。即将受检红细胞充分洗涤后，将抗球蛋白试剂加入已结合有抗体的受检红细胞悬液中，即可见细胞凝集。可用玻片法做定性试验，也可用试管法或微量法做半定量测定。用于检测新生儿溶血症、自身免疫性贫血和医源性溶血性疾病等。
（2）间接coombs试验用于检测游离在血清中的不完全抗体。即将待测血清标本加入具有特异抗原的红细胞悬液中，如果抗原抗体相应则发生结合，再加入抗球蛋白抗体，则出现红细胞凝集。本法多用于检测母体Rh（D）抗体以及因红细胞不相容的输血而产生的血型抗体。此外也可用专一特异性的抗球蛋白血清，如抗IgG、抗IgM、抗IgA、抗补体血清等，分析与红细胞表面结合的不完全抗体的Ig亚类。
【问题】肝细胞性黄疸,血中为什么两种胆红素都升高，尿胆原正常或升高？
要搞清楚这个问题，必须先弄清人体的胆红素代谢过程：
在胆红素(胆汁成分)的代谢过程中，肝细胞承担着重要任务。首先是衰老红细胞分解形成的间接胆红素随血液循环运到肝细胞表面时，肝细胞膜微绒毛将其摄取，进入肝细胞内，与Y、Z蛋白固定结合后送至光面内质网中，靠其中葡萄醛酸基移换酶的催化作用，使间接胆红素与葡萄糖醛酸结合成直接胆红素(色素I、II混合物)；在内质网、高尔基氏体、溶酶体等参与下直接胆红素排泄到毛细胆管中去。可见肝细胞具有摄取、结合、排泄胆红素的功能。
当患肝炎时，肝细胞成为各种病毒侵袭的靶子和复制繁殖的基地，在机体免疫的参与下，肝脏大量细胞功能减退，受损坏死，致部分直接、间接胆红素返流入血。血液中增高的胆红素(34.2umol/L)把眼巩膜和全身皮肤染黄，形成黄疸。
需要知道的是，各种肝炎患者的肝细胞并不是全部被破坏，健康的肝细胞会代偿性地“努力工作”，而被破坏的肝细胞基本上丧失了各种功能，并且还可以将大量的非结合胆红素、结合胆红素直接释放入血，造成血液里的总胆红素、非结合胆红素、结合胆红素浓度都有升高。
在肠道中生成的尿胆原会有一部分被吸收入血，经门脉入肝。正常情况下这部分尿胆原大多被肝细胞重新转变为结合胆红素，极少量没被肝细胞吸收的才会经肾排出，这就是尿中的尿胆原。但肝细胞受损了，就不能转化尿胆原了，所以从肠道吸收入血的尿胆原几乎全部要经肾排出。这就是为什么肠道产尿胆原少了，尿中尿胆原反而多了。
因此肝细胞性黄疸：处理障碍。血中两种胆红素都升高，尿胆原正常或升高，尿胆红素阳性。
【临床血液学检验】
红细胞数降低的程度比血红蛋白更显著，最可能的诊断是
A.失血
B.再生障碍性贫血
C.巨幼红细胞性贫血
D.溶血
E.缺铁性贫血
【正确答案】C
学员提问：失血，再生障碍性贫血，缺铁贫，是怎样的一个情况，它的红细胞和血红蛋白会有怎样的一个变化?
解析：再生障碍性贫血呈全血细胞减少，贫血属正常细胞型，亦可呈轻度大红细胞。红细胞轻度大小不一，但无明显畸形及多染现象，一般无幼红细胞出现。网织红细胞显着减少。
缺铁性贫血早期或轻度缺铁可以没有贫血或仅极轻度贫血。晚期或严重缺铁有典型的小细胞低色素型贫血。红细胞压积和血红蛋白浓度降低的程度通过红细胞计数减少的程度。还可见很少的靶形、椭圆形或其他不规则形态的红细胞。网织红细胞计数大多正常，白细胞计数正常或轻度减低。血小板计数高低不一。
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【临床血液学】
红细胞G-6-PD酶缺乏时，下列哪项试验呈阳性反应
A．抗人球蛋白试验
B．热溶血试验
C．高铁血红蛋白还原试验
D．酸溶血试验
E．血红蛋白电泳出现异常区带
【正确答案】C
学员提问：为什么
解答：红细胞G6PD缺陷症：本病分5型：蚕豆病、药物致溶贫、感染诱发溶血、新生儿高胆红素血症和遗传性非球形红细胞溶贫。①筛检试验：高铁血红蛋白还原试验：G6PD活性杂合子中等缺乏者74%～31%，脐血77%～41%；纯合子或半合子G6PD严重缺乏者大于30%，脐血小于40%。G6PD荧光斑点法：G6PD活性中等缺乏者10～30min出现荧光；严重缺乏者30min不出现荧光。②确诊试验：G6PD活性减少。
酸溶血试验是诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿症的主要确诊试验。
酸溶血试验，又称Ham试验。指病人红细胞与酸化后的血清一起置37℃环境中作用，红细胞发生破坏，即为阳性。
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【临床化学检验】
关于细胞酶的释放，错误的是
A．酶蛋白分子量的大小：试验证明酶释放的速度和分子量成正比
B．胞质中游离的酶如ALT、LD最容易释放入血
C．非血浆特异的酶在细胞内、外浓度可差千倍以上，只要有少量细胞受损伤，酶从细胞中释出，就可使血液中酶明显升高
D．血管内皮细胞和血细胞的酶直接进入血液
E．酶大部分进入组织间隙后再入血
【正确答案】C
学员提问：请解释一下。
解答:细胞酶的释放：是疾病时大多数血清酶增高的主要机制，影响细胞酶释放的主要原因有：
1）细胞内、外酶浓度的差异：非血浆特异的酶在细胞内、外浓度可差千倍以上，只要有少量细胞受损伤，酶从细胞中释出，就可使血液中酶明显升高；
2）酶在细胞内的定位和存在的形式：胞质中游离的酶如ALT、LD最容易释放入血，而在亚细胞结构中的酶则较难释放出来，特别是线粒体酶，如肝细胞中的AST常需细胞出现坏死病变时才能释放入血；
3）酶蛋白分子量的大小：试验证明酶释放的速度和分子量成反比。此因素对酶在血液出现时间的影响大于对酶浓度高低的影响，例如LD分子量大于CK，而当有心肌梗死时，LD在血液中升高的时间就晚于CK。
（3）酶在细胞外间隙的分布和运送：细胞中酶有三种途径进入血液，即：
1）血管内皮细胞和血细胞的酶直接进入血液；
2）酶可同时进入血液和组织间隙，后者再入血；
3）酶大部分进入组织间隙后再入血。
这些因素都会影响酶进入血液的时间和升高的程度。
（4）血液中酶的清除：不同疾病和不同的酶从血液中清除的时间和机制不同，同一疾病不同酶恢复正常的时间也不一样，这和酶的半寿期以及一些其他因素有关
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