甲型强心苷在碱性醇溶液中，由于五元不饱和内酯环上的双键移位产生C-22活性亚甲基，能与活性亚甲基试剂作用而显色。乙型强心苷在碱性醇溶液中，不能产生活性亚甲基，无此类反应。所以利用此类反应，可区别甲、乙型强心苷。所产生的有色化合物在可见光区常有最大吸收，故亦可用于定量。

（1）Legal反应：又称亚硝酰铁氰化钠试剂反应。取样品1～2mg，溶于2～3滴吡啶中，加3％亚硝酰铁氰化钠溶液和2mol／L氢氧化钠溶液各1滴，反应液呈深红色并渐渐退去。

（2）Raymond反应：又称间二硝基苯试剂反应。取样品约1mg，以少量50％乙醇溶解后加入间二硝基苯乙醇溶液0.1ml，摇匀后再加入20％氢氧化钠0.2ml，反应液呈蓝紫色。

（3）Kedde反应：又称3，5-二硝基苯甲酸试剂反应。取样品的甲醇或乙醇溶液于试管中，加入3，5-二硝基苯甲酸试剂（A液：2％3，5-二硝基苯甲酸甲醇或乙醇溶液；B液：2mol／L氢氧化钾溶液，用前等量混合）3～4滴，溶液呈红色或紫红色。

本试剂可用于强心苷纸色谱和薄层色谱显色剂，喷雾后显紫红色，几分钟后褪色。

（4）Baljet反应：又称碱性苦味酸试剂反应。取样品的甲醇或乙醇溶液于试管中，加入碱性苦味酸试剂（A液：１％苦味酸乙醇溶液；B液：5％氢氧化钠水溶液，用前等量混合）数滴，溶液呈橙色或橙红色。此反应有时发生较慢，需放置15分钟以后才能显色。

上述反应可以用来区别甲型强型苷和乙型强心苷，甲型呈阳性，乙型呈阴性。