磺胺类药物主要通过抑制二氢叶酸合成酶起作用。这个酶在细菌体内参与合成核苷酸的重要辅酶 - 四氢叶酸，而四氢叶酸是DNA合成的必需物质。磺胺类药物结构与对氨基苯甲酸相似，可以竞争性地抑制二氢叶酸合成酶，阻止细菌合成四氢叶酸，从而影响细菌DNA的合成，达到抑制细菌生长繁殖的效果。由于人体可以直接利用食物中的四氢叶酸，所以磺胺类药物对人体细胞的影响较小。
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