B淋巴细胞表面标志的测定原理
人类B细胞表面带SmIg,每一个B细胞表面带有不同类的Ig,即IgM、IgD、IgG、IgA、或IgE.如用荧光法标记的抗人IgM、IgD、IgG、IgA及IgE抗体,分别同标记的荧光抗体染色,则荧光抗体与B细胞表面相应的SmIg结合,在荧光显微镜下观察,凡与荧光标记抗体结合的细胞则细胞膜呈现荧光,为SmIg阳性细胞,即B细胞,同时用普通光源照明,医|学教育网搜集整理计数该视野的淋巴细胞总数,根据发荧光和不发荧光细胞的计数,可求得带各类SmIg细胞的百分数。把这些数相加为血液中B细胞的百分数。
试剂
(1)异硫氰荧光素(FITC)标记的兔抗人IgG,兔抗人IgM抗体,F/P在分子比值为1~2.
(2)Hank液(含1.0g/L.NaN3),调pH至7.4.
(3)聚蔗糖-泛影葡胺淋巴细胞分层液(比重1.077)。
(4)50%PBS缓冲甘油。