方法名称：

硝酸异山梨酯—硝酸异山梨酯的测定—高效液相色谱法

应用范围：

本方法采用高效液相色谱法测定硝酸异山梨酯中硝酸异山梨酯（C6H8N2O8）的含量。

本方法适用于硝酸异山梨酯中硝酸异山梨酯的含量测定。

方法原理：

取本品适量，加甲醇溶解，用水稀释，放冷至室温，制成溶液，量取该溶液加内标后流动相稀释，注入液相色谱仪，在230nm波长处检测，记录色谱图。按内标法以峰面积计算，即得。

试剂：

1.甲醇

2. 氢化泼尼松

仪器设备：

1.仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论板数按硝酸异山梨酯峰计算应不低于5000。

1.3 紫外吸收检测器

2.色谱条件

2.1 流动相：甲醇+水= 54 46

2.2 检测波长：230nm

2.3 柱温：室温

试样制备：

1.对照品溶液的制备

精密称取硝酸异山梨酯对照品25mg，置50mL量瓶中，加甲醇27mL溶解后，用水稀释，放冷至室温，再用水稀释至刻度，摇匀，为对照品溶液。

2.内标溶液的配制

精密称取氢化泼尼松适量，加流动相溶解并稀释制成每1mL中约含80μg的溶液，记得。

3.供试品溶液的制备

取本品约25mg，精密称定，置50mL量瓶中，加甲醇27mL溶解后，用水稀释，放冷至室温，再用水稀释至刻度，摇匀，为供试品溶液。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

操作步骤：

精密量取供试品溶液与内标液各5mL，置25mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。精密量取20μL注入高效液相色谱仪，于230nm波长处测定硝酸异山梨酯的吸收值，另精密量取对照品溶液5mL同上处理，测定。计算出其含量。

参考文献：

中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005年版，二部，p.709-710。