方法名称：

格列本脲片—格列本脲的测定—高效液相色谱法

应用范围：

本方法采用高效液相色谱法测定格列本脲片中格列本脲的含量。

本方法适用格列本脲片。

方法原理：

供试品和内标均制成流动相溶液，进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长274nm处检测格列本脲（C23H28ClN3O5S）和内标对羟基苯甲酸丁酯的吸收值，计算出其含量。

试剂：

1.甲醇

2. 磷酸二氢铵溶液：取磷酸二氢铵1.725g，加水300mL溶解，用磷酸调节pH值至3.5±0.05

仪器设备：

1. 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论板数按格列本脲峰计算应不低于 1000，格列本脲峰与内标物质峰的分离度应符合要求。

1.3 紫外吸收检测器

2. 色谱条件

2.1 流动相：甲醇 磷酸二氢铵溶液=5 3

2.2 检测波长：274nm

2.3 柱温：室温

试样制备：

1. 称取供试品

取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于格列本脲20mg）。

2. 内标溶液的制备

取对羟基苯甲酸丁酯10mg，置100mL量瓶中，加甲醇6mL，超声处理使溶解后，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

3. 供试品溶液的制备

上述供试品置50mL量瓶中，加甲醇12mL，超声处理使格列本脲溶解，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液25mL与内标溶液5mL，至50mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

4. 对照品溶液的制备

精密称取格列本脲对照品适量，与供试品同法配制。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

操作步骤：

精密量取上述供试品溶液及对照品溶液20μL 注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长274nm处测定格列本脲及内标对羟基苯甲酸丁酯的吸收值，按内标法以峰面积计算，即得。

参考文献：

中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005年版，二部，p595。