方法名称： 亚甲蓝注射液—亚甲蓝的测定—分光光度法

应用范围： 本方法采用分光光度法测定亚甲蓝注射液中亚甲蓝的含量。

本方法适用于亚甲蓝注射液。

方法原理： 供试品加稀乙醇制成供试液，置紫外可见分光光度计，于661nm波长处测定吸收度，计算出其含量。

试剂： 1.稀乙醇

仪器设备： 紫外可见分光光度计

试样制备： 1.稀乙醇

取乙醇529mL，加水稀释至1000mL。

2.对照品溶液的制备

精密称取亚甲蓝对照品适量，加稀乙醇定量稀释制成每1mL中约含2µg的溶液，即得对照品溶液。

3.供试品溶液的制备

精密量取供试品适量（约相当于亚甲蓝20mg），加稀乙醇定量稀释制成每1mL中约含2µg的溶液，即得供试品溶液。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

操作步骤： 取对照品溶液与供试品溶液照紫外-可见分光光度法，于波长661nm处测定吸收度。将结果与1.169相乘，即得供试量中含有C16H18ClN3S·3H2O的量。

注：分光光度法应以配制供试品的同批溶剂为对照，采用1cm的石英吸收池。以吸收度最大的波长作为测定波长，一般供试品的吸收度读数，以在0.3-0.7之间的误差较小。仪器的狭缝波带宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否则测得的吸收度偏低。狭缝宽度的选择，应以减少狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准。由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试品的吸收度后应减去空白读数，再计算含量。

参考文献： 中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005年版，一部，p.189。