硅胶照高效液相色谱法（附录ⅤD）测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(75:25)为流动相；检测波长为254nm。取溴醋己烷雌酚对照品约10mg，加氯仿50ml使溶解，在暗处放置不少于5小时，量取5.0ml，挥干氯仿，残渣（已烯雌酚的顺式体和反式体）加乙醇-水(1:1)25ml使溶解，取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，已烯雌酚反式体峰与顺式体峰的相对保留时间分别为1:1.33。
理论板数按已烯雌酚反式体峰计算应不低于1000，溴醋己烷雌酚反式体峰与顺式体峰的分离度应大于3.0。测定法取溴醋己烷雌酚对照品适量，精密称定，加乙醇-水(1:1)溶解并稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液，取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取本品适量，同法测定，按外标法以已烯雌酚反式体峰面积和顺式体峰面积的总和（已烯雌酚顺式体峰的面积与1.26相乘）计算，即得。
