供试品经氨试液及混合溶剂（乙醚-氯仿-无水乙醇）提取，提取液移至分液漏斗中用0.05mol/L硫酸溶液提取，提取液氨碱化后用氯仿提取数次，合并氯仿液，定容。取一定量在pH3.0缓冲液中与溴甲酚绿反应后，分出氯仿置于分光光度计，于波长412nm处测定吸收度，按乌头碱（C34H47NO11）计算其含量。

1、试剂：

乙醚、氯仿、无水乙醇、氨试液 取浓氨溶液400mL，加水使成1000mL；浓氨试液 取用“浓氨溶液”、0.05mol/L硫酸溶液、pH3.0醋酸盐缓冲液 称取无水醋酸钠0.15g，加水使溶解，加冰醋酸5.6mL,用水稀释至500mL，摇匀，并在pH计上校正；0.1%溴甲酚绿 取溴甲酚绿0.2g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液3.2mL使溶解，用水稀释至200mL，摇匀。

仪器设备： 可见分光光度计。

2、试样制备：

对照品溶液的制备：

精密称取105℃干燥至恒重的乌头碱对照品10毫克，置100毫升量瓶中，加氯仿溶解并稀释至刻度，混匀，制成每1毫升含乌头碱0.1毫克的溶液。

供试品溶液的制备。

精密称取供试品试样1克，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醚-氯仿-无水乙醇（16∶8∶1）的混合溶液25毫升和氨试液1.5毫升，摇匀，称定重量，于快速混匀器上振荡三次，每次振荡2分钟，放置过夜，称定重量，用上述混合溶液补足减失的重量，再于快速混匀器上振荡2分钟，静置，倾取上清液，精密量取5mL，置分液漏斗中，加乙醚5毫升，用0.05mol/L硫酸溶液提取4次，每次10毫升，分取硫酸液，滤过，合并滤液，置另一分液漏斗中，加浓氨试液4 毫升，摇匀，用氯仿提取4次，每次10毫升，分取氯仿层，滤过，合并滤液，蒸干，残渣于105℃ 加热1小时，取出，放冷，加氯仿分次溶解，转移至25mL量瓶中，加氯仿稀释至刻度，摇匀, 作为供试品溶液。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

3、操作步骤：

标准曲线的绘制：

精密量取对照品溶液0.0毫升、1.0毫升、2.0毫升、3.0毫升、4.0毫升、5.0毫升，分别置分液漏斗中，依次精密加入氯仿20毫升，再精密加入pH3.0醋酸盐缓冲液10毫升，和0.1%溴甲酚绿溶液2.0毫升，强力振摇5分钟，静置20分钟，分取氯仿层，以干燥滤纸过滤，滤液照分光光度法，分别在412纳米波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

供试品的测定：

精密量取上述供试品溶液20毫升，置分液漏斗中， 照标准曲线的制定项下的方法，自“加pH3.0醋酸盐缓冲液10毫升”起，依法测定吸收度。

参考文献： 中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005年版，一部，p.395。