纤维蛋白原溶液的制备 取纤维蛋白原约30mg,精密称定,用0.9% 氯化钠溶液1.5ml溶解,加凝血酶0.1ml(约3单位),快速摇匀,室温放置约1小时至完全凝固,取出凝固物,用水洗至洗出液加硝酸银试液不产生浑浊,在105℃干燥3小时,称取重量,计算纤维蛋白原中含凝固物的含量(%)。然后用0.9%氯化钠溶液制成含0.2%凝固物的纤维蛋白原溶液,用0.05mol/L磷酸氢二钠溶液或0.05mol/L磷酸二氢钠溶液调节pH值至7.0~7.4,再用0.9%氯化钠溶液稀释成含0.1%凝固物的溶液,备用。
标准曲线的制备 取凝血酶标准品,用0.9%氯化钠溶液分别制成每1ml中含5.0单位、6.4单位、8.0单位、10.0单位的标准品溶液。另取内径1cm、长10cm的试管4支,各精密加入纤维蛋白原溶液0.9ml,置37℃±0.5℃水浴中保温5分钟,再分别精密量取上述4种浓度的标准品溶液各0.1ml,迅速加入上述各试管中,立即计时、摇匀,置37℃±0.5℃水浴中,观察纤维蛋白的初凝时间,每种浓度测5次,求平均值(5次测定之最大值与最小值的差不得超过平均值的10%,否则重测)。标准品溶液的浓度应控制凝结时间在14~60秒为宜。在双对数坐标纸上,以每管中标准品实际效价(单位)为横坐标,凝结时间(秒) 为纵坐标,绘制标准曲线。![测定法计算公式 测定法计算公式](/image/2012052515091518559.jpg)
测定法 取本品3瓶,分别精密称定其内容物的重量,每瓶按标示量分别加0.9%氯化钠溶液制成与标准曲线浓度相当的溶液,精密吸取0.1ml,按标准曲线的制备方法平行测定5次,求出凝结时间的平均值(误差要求同标准曲线),在标准曲线上或用直线回归方程求得效价(单位),按下式计算:
式中U为0.1ml供试品在标准曲线上读得的实际效价(单位);
V为每瓶供试品溶解后的体积,ml;
10为0.1ml换算成1.0ml的数值;
W为每瓶供试品的重量,mg。
并计算出每瓶相当于标示量的百分数。
每瓶效价均应符合规定,如有一瓶不符合规定,另取3瓶复试,均应符合规定。