方法名称： 双唑泰栓－甲硝唑、克霉唑与醋酸氯己定－高效液相色谱法

应用范围： 本方法采用高效液相色谱法测定双唑泰栓中甲硝唑、克霉唑与醋酸氯己定的含量。

本方法适用于双唑泰栓。

方法原理： 供试品置70~80℃水浴上温热熔融，经流动相溶解进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长260nm处检测甲硝唑、克霉唑与醋酸氯己定的峰面积，计算出其含量。

试剂： 1. 甲醇

2.三乙胺

3. 庚烷磺酸钠

4. 磷酸

仪器设备： 1. 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论塔板数按克霉唑峰计算应不低于2500，甲硝唑峰、克霉唑峰与氯己定峰的分离度应符合要求。

1.3 紫外吸收检测器

2. 色谱条件

2.1 流动相：甲醇 水 三乙胺=70 30 0.3（含庚烷磺酸钠10mmol/L，用磷酸调pH值至4.0）

2.2 检测波长：260nm

2.3 柱温：室温

试样制备： 1. 称取供试品

取供试品10粒，精密称定，置小烧杯中，置70~80℃水浴上温热熔融，在不断搅拌下冷却至室温，精密称取适量（约相当于甲硝唑20mg）为供试品。

2. 对照品溶液的制备

精密称取甲硝唑、克霉唑与醋酸氯己定对照品适量，用流动相溶解并定量稀释，制成每1mL约含甲硝唑200µg、克霉唑160µg与醋酸氯己定80µg的溶液，即为对照品溶液。

3. 供试品溶液的制备

取供试品置100mL量瓶中，加流动相适量，置70~80℃中充分振摇10分钟，使供试品溶解，冷却至室温，用流动相稀释至刻度，摇匀，置冰浴中冷却2小时，取出迅速滤过，待续滤液放置至室温，即为供试品溶液。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

操作步骤： 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20mL，注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器于波长260nm处测定甲硝唑（C6H9N3O3）、克霉唑（C22H17ClN2）与醋酸氯己定（C22H30Cl2N10·2C2H4O2）的峰面积，计算出其含量。