方法名称：
盐酸去甲万古霉素的测定—高效液相色谱法
应用范围：
本方法采用高效液相色谱法测定盐酸去甲万古霉素（C65H73Cl2N9O24 ·HCl）的含量。
本方法适用于盐酸去甲万古霉素。
方法原理：
供试品加水溶解并定量稀释，进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长280nm处检测盐酸去甲万古霉素吸收值，计算出其含量。
试剂：
1. 三乙胺缓冲液
2. 乙腈
3. 四氢呋喃
仪器设备：
1. 仪器
1.1 高效液相色谱仪
1.2 色谱柱
十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论塔板数按去甲万古霉素峰计算不低于1500。
1.3 紫外吸收检测器
2. 色谱条件
2.1 流动相：梯度洗脱，见下表：
流动相A：三乙胺缓冲液 乙腈 四氢呋喃=96 3 1
流动相B：三乙胺缓冲液 乙腈 四氢呋喃=70 29 1
时间（分钟）
流动相A（%）
流动相B（%）
0
100
0
23
100
0
38
0
100
40
0
100
41
100
0
50
100
0
2.2 检测波长：280nm
2.3 柱温：室温
试样制备：
1. 三乙胺缓冲液
取三乙胺6mL，加水2000mL，用磷酸调节pH值至3.2
2. 称取供试品
精密称取本品适量。
3. 对照品溶液的制备
精密称取适量，加水溶解并制成每1mL含1.0mg的溶液，摇匀，即得。
4. 供试品溶液的制备
将供试品加水使溶解后，并制成每1mL含1.0mg的溶液，摇匀，即得。
注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。
操作步骤：
分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各20μL 注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长280nm处测定去甲万古霉素的吸收值，计算出其含量。
参考文献：
中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005年版，二部，p.467。
