方法名称： 银杏叶片－总黄酮醇苷的测定－高效液相色谱法

应用范围： 本方法采用高效液相色谱法测定银杏叶片中总黄酮醇苷的含量。

本方法适用于中成药银杏叶片。

方法原理： 本品粉末加甲醇超声处理，放冷，补重，摇匀，滤过，续滤液加甲醇、25%盐酸溶液加热回流，冷却，用甲醇定容，摇匀，滤过，续滤液进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长360nm处检测槲皮素、山柰素、异鼠李素的吸收值，计算出其含量。

试剂： 1. 甲醇

2. 甲醇-25%盐酸溶液（4：1）混合溶液

3. 0.4%磷酸溶液

仪器设备： 1 仪器

1.1高效液相色谱仪

1.2色谱柱

十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论塔板数按槲皮素峰计算应不低于2500。

1.3 紫外吸收检测器

2色谱条件

2.1流动相：甲醇 0.4%磷酸溶液=50 50

2.2检测波长：360nm

2.3柱温：室温

试样制备： 1. 称取供试品

取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取约相当于总黄酮醇苷19.2mg的粉末，精密称定，为供试品。

2. 对照品溶液的制备

分别精密称取槲皮素对照品、山柰素对照品、异鼠李素对照品适量，加甲醇制成每1mL含30mg、30mg、20mg的混合溶液。或取已标示槲皮素、山柰素、异鼠李素含量的银杏叶对照提取物35mg，精密称定，加甲醇-25%盐酸溶液（4：1）混合溶液25mL，照供试品溶液的制备方法，自‘置水浴中加热回流30分钟’起，同法制成对照提取物溶液。

3. 供试品溶液的制备

取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取约相当于总黄酮醇苷19.2mg的粉末，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20 mL，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率33kHz）20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 mL，置100 mL锥形瓶中，加甲醇10 mL、25%盐酸溶液5 mL，摇匀，置水浴中加热回流30分钟，迅速冷却至室温，转移至50 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

操作步骤： 分别精密吸取对照品溶液（或对照提取物溶液）和供试品溶液各10mL，注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器于波长360nm处测定槲皮素（C15H10O7）、山柰素（C15H10O6）和异鼠李素（C16H12O7）的峰面积，计算出其含量。

参考文献： 中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005版，一部，p597