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鼻渊舒口服液临床研究

材料

1 药物鼻渊舒口服液的制备,由成都华神制药厂生产,主要由黄芩、龙胆草、白芷、柴胡、苍耳子、辛夷、黄芪、川芎等组成。稀化粘素,德国保时佳大药厂生产, 进口注册证号:X980578。青霉素V钾片,长春市新安制药厂生产,批号:133589。2 动物 SD大鼠90只,一级动物,体重200~250 g,3月龄,雌雄各半,四川大学华西医学中心实验动物中心提供,合格证号:川实动管第70号。饲养于成都中医药大学附属医院药理实验中心,室内温度由空调控制在20~25℃。

3 试剂TNF-α(N-19)一抗购自Santa Cruz Biotechnology 公司,其二抗以及试剂盒购自北京中山生物技术有限公司。

方法

1 动物分组 自由喂养 1 周后,将实验动物随机分为①中药高剂量组;②中药中剂量组;③中药低剂量组;④西药1(稀化粘素)组;⑤西药2(青霉素V钾)组;⑥西药+中药组;⑦模型组;⑧假模型组;⑨空白组。每组10只,共90只。2 急性鼻窦炎大鼠模型 依据Y. Ge1的方法制造模型改进。腹腔注射盐酸氯胺酮5 mg/100 g体重,必要时用一般剂量重复 1 次,做全麻。用盐酸利多卡因20 mg/ml,配肾上腺素0.012 5 mg,作鼻背下注射麻醉。剃毛,用碘伏消毒备皮,在面中线上中1/3交界处旁开3 mm以45°角进针1.5 mm置石蜡适量于内封口;然后塞入适量带有金黄色葡萄球菌的明胶海绵于内,由于是微创,不必缝合。以上过程应在显微镜下操作,以确保动作到位。假模型组造模方法同上,但注入明胶海绵的不是金黄色葡萄球菌,而是生理盐水。

给药情况

从造模成功后的第1天开始灌胃,疗程时间为7 d,灌胃情况如下:

(1)中药高剂量组 每日以相当于临床成人剂量20倍的鼻渊舒口服液〔相当于鼻渊舒口服液10 ml/(kg·d)-1〕灌胃,分早晚两次灌服。

(2 )中药中剂量组 每日以相当于临床成人剂量10倍的鼻渊舒口服液〔相当于鼻渊舒口服液5 ml/(kg·d)-1〕灌胃,分早晚两次灌服。

(3) 中药低剂量组 每日以相当于临床成人剂量5倍的鼻渊舒口服液〔相当于鼻渊舒口服液2.5 ml/(kg·d)〕灌胃,分早晚两次灌服。

(4 )西药1组每日以相当于临床成人剂量5倍的稀化粘素〔相当于稀化粘素75 mg/(kg·d)〕灌胃,分早晚两次灌服。

(5 )西药2组每日以相当于临床成人剂量5倍的青霉素V钾〔相当于青霉素V钾 125 mg/(kg·d)〕;灌胃,分早晚两次灌服。

(6) 假模型组每日以与用药组等容(2 ml/d)的生理盐水灌胃,分早晚两次灌服。

(7 )模型组每日以与用药组等容(2 ml/d)的生理盐水灌胃,分早晚两次灌服。

(8 )空白组不灌胃

(9 )中药+西药组每日以临床成人剂量6倍的鼻渊舒口服液(浓度0.815 925 g/ml)2~3 ml和含药量相当于150 mg·kg-1·d-1的青霉素与稀化粘素灌胃,分早晚二次灌服。给药方法参照《中药药理实验方法》。

检测方法首先要及时把取下的鼻黏膜放在固定液中保存,经脱钙后,按照下列步骤进行:①石蜡切片脱蜡至水,用PBS液(0.01 mol/L pH7.4)冲洗3次×5 min。②3%H2O2室温孵育10 min,以消除内源性过氧化物酶的活性,室温下孵育10 min。③蒸馏水冲洗,PBS浸泡5 min。④10%的正常山羊血清(PBS稀释)封闭,室温孵育10 min。倾去血清,勿洗,滴加1:100比例稀释的一抗,37℃孵育1 h。⑤PBS冲洗,5 min×3次。⑥滴加第二代生物素标记二抗工作液,37℃或室温孵育30 min。⑦PBS冲洗,5 min×3次。⑧滴加第二代辣根酶标记链霉卵白素工作液,37℃孵育30 min。⑨PBS冲洗,5 min×3次。⑩显色剂显色(DAB或AEC)。然后用自来水充分冲洗,苏木精复染,封片。用显微镜结合计算机图形图像分析系统,在200×光镜下,随机选取3个视野进行面积、积分光密度、平均黑度的测量。计量资料以±s表示,用SPSS13.0软件进行单因素方差分析。

结果

模型组大鼠鼻黏膜TNF-α积分光密度、平均光密度分别与测量视野面积和的比值,明显高于正常对照组(P<0.01);平均黑度值明显低于正常对照组(P<0.01);但黄染面积与面积总和的比值无统计学意义。与空白组相比:①积分光密度/面积总和的比值,中药低、中剂量组、西药一组、假模型组无显著性差异(P>0.05),其中以中药低剂量组最为接近;②黄染面积/面积总和的比值,无统计学意义;③平均光密度与面积总和的比值,西药1组、中药低剂量组、西药2组无显著性差异(P>0.05)。④平均黑度,中药低、中组,西药1,2组无显著性差异(P>0.05)。结果见表1。

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