方法名称：

腺苷钴胺片—腺苷钴胺的测定—分光光度法

应用范围：

本方法采用分光光度法测定腺苷钴胺片中腺苷钴胺（C72H100CoN18O17P）的含量。

本方法适用于腺苷钴胺片中腺苷钴胺的测定。

方法原理：

取本品适量，除去包衣，研细，用水溶解并稀释，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液为供试品溶液，并用水配制对照品溶液，分别取对照品和供试品溶液适量，各精密加0.65%氰化钾溶液，密塞，摇匀，在两侧距离200mm处，用100W白炽灯各一个同时照射1小时，照紫外-可见分光光度法，在368nm波长处，分别测定吸收度，计算，并将计算结果与1.165相乘。

试剂：

1. 蒸馏水

2. 氰化钾

仪器设备：

1. 可见分光光度计

2. 白炽灯

试样制备：

1. 对照品溶液的制备

取维生素B12对照品约20mg，精密称定，置500mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即为对照品溶液。

2. 供试品溶液的制备

取本品10片，除去包衣，研细，用水分次转移至50mL量瓶中，振摇，使腺苷钴胺溶解并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即为供试品溶液。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

注：“水分测定”用烘干法。取供试品2-5g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm，疏松样品不超过10mm，精密称定，打开瓶盖在100-105℃干燥5小时，将瓶盖盖好，移至干燥器中，冷却30分钟，精密称定重量，再在上述温度干燥1小时，冷却，称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失的重量，计算供试品中含有水分的百分数。

操作步骤：

供试品的测定

精密量取上述对照品和供试品溶液各10mL，分别置25mL具塞试管中，各精密加0.65%氰化钾溶液15mL，密塞，摇匀，在两侧距离200mm处，用100W白炽灯各一个同时照射1小时，照紫外-可见分光光度法，在368nm波长处，分别测定吸收度，计算，并将计算结果与1.165相乘。