照高效液相色谱法(中国药典1995年版一部附录Ⅵ D)测定。 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;冰醋酸溶液(1→90)-乙腈(61:39)为流动相,检测波长为260nm,理论板数按龙血素B峰计算应不低于5000,龙血素B峰和内标峰的分离度应不少于4.0。 内标溶液的制备 精密称取炔诺酮适量,加乙腈使溶解并制成每1ml含50μg的溶液,即得。 测定法 精密称取龙血素B对照品适量,加氯仿使溶解并制成每1ml含20μg的溶液,精密量取该溶液3ml,水浴蒸干,残渣加入精密量取的内标溶液2ml,使溶解,取10μl注入液相色谱仪,记录色谱图;另取本品粉末(通过三号筛)约1g,精密称定,加硅藻土2g,混匀,置索氏提取器中,加氯仿100ml,置水浴中加热回流6小时,提取液减压浓缩至近干,加醋酸乙酯适量使溶解。移置10ml量瓶中,用醋酸乙酯洗涤容器并稀释至刻度,摇匀,滤过,弃去初滤液,收集续滤液作为供试品溶液。照薄层色谱法(中国药典1995年版一部附录Ⅵ B)试验,精密量取供试品溶液200μl,点于含羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶HF254薄层板上,使成条状,在供试品条斑侧1.5cm处点龙血素B对照品溶液10μl,作为对照。用石油醚(60~90℃)-氯仿-醋酸乙酯-甲醇(15:8:2:1)为展开剂,展开。取出,晾干,置紫外光灯(254nm)下检视,刮取与龙血素B对照品相应位置上的条斑。置3号垂熔玻璃漏斗中,用乙醇25ml洗脱,收集洗脱液,减压蒸干。残渣加入精密量取的内标溶液2ml使溶解,取10μl注入液相色谱仪,按内标法以峰面积计算,即得。 本品含龙血素B(C18H20O5)不得少于0.40%。
注:聚酰胺的处理:取聚酰胺粉以90%~95%乙醇浸泡,不断搅拌,除去气泡后装入层析柱中。用3~4倍体积的90%~95%乙醇洗涤,洗至洗液透明并且蒸干后无残渣(或极少残渣)。再依次用2~2.5倍体积的5%NaOH水溶液,1倍体积的蒸馏水,2~2.5倍体积的10%醋酸水溶液洗涤,最后用蒸馏水洗涤呈中性为止,取出烘干备用,即得。