口腔医学知识

首页 > 口腔医学知识 > 粘膜病 > 正文

复发性口腔溃疡和消化性溃疡患者口腔及胃粘膜中的幽门螺杆菌

  条件控制

  ①所有受检者取样前1周内未服用任何抗生素、铋剂、抗酸剂及H2受体拮抗剂,1个月内未服用类固醇类药物或非类固醇类抗炎药如阿司匹林等;②所有受检者均无严重全身性系统疾病,非Ⅱ度或Ⅱ度以上牙周炎患者、非口腔粘膜扁平苔藓患者;③各组间年龄、性别、取样位置和方法、患者牙周条件等可控制因素通过均衡检验,证实无差异,具有可比性。

  Hp-PCR检测方法

  所有受检者检测晨均按指导刷牙,取样前用无菌生理盐水轻轻将口腔漱干净,然后刮取每位受检者颊、舌、口底、软腭粘膜少许(ROU患者以溃疡假膜代替相应部位的口腔粘膜),同时通过胃镜取胃体部粘膜(PU患者取溃疡部位)作为标本,置于无菌生理盐水的尖嘴离心管,-40℃保存备检。将备检标本放入400μl无菌生理盐水溶液中离心12000r/min×5min,弃上清,加DNA裂解液50μl,蛋白酶K2μl,55℃孵育1h,100℃水浴10min,同时设置阳性模板和阴性对照(PacificEcon-TechCo.USAPCR试剂盒);15000r/min×5min离心后,取5μl进行PCR检测。PCR扩增产物取15μl,用15g/L琼脂糖凝胶(含0.5g/L溴化乙锭)经TAE电泳缓冲液,电泳30min(电压5v/cm)后在紫外透射反射仪300nm下观察结果,如果在200bp处出现橙黄色条带,则诊断为Hp阳性(+)。

  胃粘膜Hp培养:

  C组口腔Hp阳性患者的胃粘膜做Hp培养,以使与口腔Hp比较。在幽门前5cm范围内用灭活活检钳钳取组织2块,置于装有30%甘油/布氏肉汤转送液0.5ml无菌离心管中-20℃保存。用改良Skirrow培养基,在含6%微氧条件下37℃培养2~4天后观察医学教育 网搜集整理。

  口腔Hp抗Hp免疫荧光抗体染色

  ①荧光抗体的制备:胃粘膜培养出来的Hp4株混合配制成每毫升10亿个细菌的悬浮液,耳缘静脉注射免疫家兔,8次后查血,凝集效价为1:2560,特异性实验与大肠杆菌、空肠弯曲菌凝集效价均不超过1:80.抗体血清用不饱和硫酸铵提成粗球。再用0.25mol/L硫酸盐缓冲液将粗球抗体稀释成1%浓度后装入透析液中,用同一缓冲液将异硫氰酸荧光素配成0.1g/L,10倍于1%抗体体积,放入烧杯中,用电磁搅拌器在4℃冰箱内透析24小时,经sephadex-G50层析,去除游离荧光素。②染色方法:将口腔溃疡假膜稀释于0.1ml的生理盐水中,搅匀后涂于盖玻片上,经固定后滴上荧光抗体,置于37℃暗室冰箱中30分钟,再经pH值7.2的硫酸盐缓冲液冲洗3次,封片。荧光显微镜观察,以胃粘膜培养出的Hp作阳性对照。

打开APP看资讯 更多更快更新鲜 >>
热点推荐:
取消
复制链接,粘贴给您的好友

复制链接,在微信、QQ等聊天窗口即可将此信息分享给朋友
前往医学教育网APP查看,体验更佳!
取消 前往