杂交瘤技术的基本原理:
杂交瘤技术的原理是利用聚乙二醇(PEG)为细胞融合剂,使免疫的小鼠脾细胞与具有体外长期繁殖能力的小鼠骨髓瘤细胞融为一体,在HAT选择性培养基的作用下,只让融合成功的杂交瘤细胞生长,经过反复的免疫学检测、筛选和单个细胞培养(克隆化),最终获得既能产生所需单克隆抗体,又能长期繁殖的杂交瘤细胞系。将这种杂交瘤细胞扩大培养,接种于小鼠腹腔,在小鼠腹腔积液中即可得到高效价的单克隆抗体。
一、杂交瘤技术
杂交瘤技术是一项周期长和高度连续性的实验技术,涉及大量的细胞培养、免疫化学等方法。具体包括两种亲本细胞的选择与制备,细胞融合,杂交瘤细胞的筛选与克隆化等。
(一)小鼠骨髓瘤细胞
用于细胞融合的理想骨髓瘤细胞应该是:①细胞株稳定,易于传代培养;②细胞株自身不会产生免疫球蛋白或细胞因子;③该细胞是次黄嘌呤磷酸核酸核糖转化酶(HGPRT)的缺陷株。目前最常用的骨髓瘤细胞是NS-1和SP2/O细胞株。
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