絮状沉淀试验为历史较久,又较有用的方法。该法要点是:将抗原与抗体溶液混合在一起,在电解质存在下,抗原与抗体结合,形成絮状沉淀物。医学教/育网搜集整理这种沉淀试验受到抗原和抗体比例的直接影响,因而产生了两种最适比例的基本测定方法。
(一)抗原稀释法
抗原稀释法(Dean-Webb法)是将可溶性抗原作一系列稀释,与恒定浓度的抗血清等量混合,置室温或37℃反应后,产生的沉淀物随抗原的变化而不同。以牛血清白蛋白为例的实验结果。
Dean-Webb定量沉淀试验
管号 |
抗原 |
抗体 |
总沉淀量 |
反应过剩物 |
抗原沉淀量 |
抗体沉淀量 |
沉淀中Ab/Ag |
1 |
0.003 |
0.68 |
0.093 |
Ab |
0.003 |
0.090 |
30.0 |
2 |
0.005 |
0.68 |
0.145 |
Ab |
0.005 |
0.140 |
28.0 |
3 |
0.011 |
0.68 |
0.249 |
Ab |
0.011 |
0.238 |
21.7 |
4 |
0.021 |
0.68 |
0.422 |
Ab |
0.021 |
0.401 |
19.1 |
5 |
0.032 |
0.68 |
0.571 |
Ab |
0.032 |
0.539 |
16.8 |
6 |
0.043 |
0.68 |
0.734 |
- |
0.043 |
0.691 |
16.1 |
7 |
0.064 |
0.68 |
0.720 |
Ab |
- |
- |
- |
8 |
0.085 |
0.68 |
0.601 |
Ag |
- |
- |
- |
9 |
0.171 |
0.68 |
0.464 |
Ag |
- |
- |
- |
10 |
0.341 |
0.68 |
0.368 |
Ag |
- |
- |
- |
(二)抗体稀释法(Ramon法)
本法采用恒定的抗原量与不同程度稀释的抗体反应,计算结果同上法,得出的是抗体结合价和最适比。
方阵最适比测定
抗体稀释度 |
抗原稀释度 |
1/10 |
1/20 |
1/40 |
1/80 |
1/160 |
1/320 |
1/640 |
1/12 |
对照 |
|
1/5 |
+ |
++ |
+++ |
+++ |
++ |
+ |
± |
- |
- |
1/10 |
+ |
++ |
++ |
++ |
+++ |
++ |
+ |
- |
- |
1/20 |
+ |
+ |
++ |
++ |
+++ |
++ |
+ |
- |
- |
1/40 |
- |
± |
+ |
+ |
++ |
+++ |
++ |
+ |
- |
1/80 |
- |
- |
- |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
"+"为沉淀物量:为最适比
现今,为了取得抗原与抗体的最佳比例,已将以上两法相结合,即抗原和抗体同时稀释,称为棋盘格法(亦称方阵法),找出最佳配比。