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以取自阴道后穹窿的分泌物、尿液沉淀物或前列腺液中查见滋养体为确诊依据。
常用的方法有：
生理盐水直接涂片法或涂片染色法(瑞氏或姬氏液染色)，镜检滋养体。
也可用培养法，将分泌物加入肝浸液培养基内，37℃温箱内孵育48小时后镜检，检出率较高，可作为疑难病例的确诊及疗效评价的依据。
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