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麻疹病毒IgM抗体检测标准操作过程

[前言]

麻疹是由麻疹病毒引起的急性呼吸道传染病。好发于冬春季,6个月至5岁儿童发病率最高,近年来由于疫苗免疫的结果,麻疹流行强度减弱,发病年龄后移。病毒可通过空气飞沫传播。易感者接触麻疹病毒,90%发病,所以传染性强,。病人是唯一的传染源。自出疹前2天至出疹后5天,传染性最强。任何人都容易感染,尤其儿童最多见,隐性感染率低。病毒先侵入眼、呼吸道,并在局部粘膜增殖,少量入血。然后随血流侵入全身淋巴组织和单核吞噬系统,并在其内大量增殖,再次入血,即第二次病情血症,出现高热和出疹,病毒血症持续至出疹后第2天。全身性迟发型超敏性细胞免疫反应。免疫性损害造成组织坏死和炎性反应。可见皮疹,由于真皮肿胀,增生皮疹鼓出,突出于皮面,为充血性的。有单核细胞炎症浸润,红细胞崩解,血浆渗出。所以皮疹有色素沉着,表皮细胞坏死、脱屑。还可见柯氏斑,是粘膜下的细胞变性,坏死,多核巨细胞变引起的,呈白点状。病毒侵袭任何组织时均出现多核巨细胞。呼吸道病变最严重,可并发麻疹脑炎。麻疹病毒可干扰人体非特异性免疫力,干扰被结核菌素致敏的淋巴细胞敏感性,但极易继发细菌感染。麻疹的潜伏期6—18天,发病突然。

[原理]

本试剂盒先用吸收液去除IgG,再检测人血清或血浆中的抗-HSV-Ⅱ?IgM,消除假阴性。具有简便、快速等优点。

[试剂厂家]

深圳市绿瀚生物技术有限公司[试剂盒组成] 1、包被板条2、定标液3、阴阳对照血清4、酶结合物5、底物6、显色液7,终止液8,洗涤液9,吸收液[试剂的稳定性与贮存]试剂自生产日起避光贮存于2-8℃,有效期内稳定。

[标本的收集与处理]

标本为无溶血血清。

[操作步骤]

1,样本稀释:用血清稀释液1:41稀释定标液、质控、血清,取稀释定标液、质控、血清150ul于另一管中,加吸收液150ul,彻底混匀,室温(21-25℃)静置20+/-5分钟。

2,加样:取包被板,加入吸收稀释定标液、质控、血清样本各100ul.并设空白对照一孔,室温(21-25℃)静置20+/-2分钟。甩去,加洗涤液一滴,蒸馏水洗涤5次,拍干。

3,反应:加酶结合物100ul,室温(21-25℃)静置20+/-2分钟。甩去,每孔加洗涤液一滴,蒸馏水洗涤5次,拍干。

4,显色:每孔加底物和显色液各100ul,室温(21-25℃)静置10+/-2分钟。以阳性对照出现明显蓝色为准。

[结果判定]

1、目测法:在白色背景下观察各孔颜色,明显兰色为阳性,无色或极淡兰色为阴性。

2、酶标仪检测(选择波长450nm):每孔加终止液一滴,用空白孔校零,测定各孔OD值。

临界值(C.O.)=2.1×阴性对照OD值

(1)样本OD值S/C.O.≥1.0判为阳性;

(2)样本OD值S/C.O.<0.9判为阴性。

(3)样本OD值S/C.O.介于0.9与1.0之间,判为可疑,需重复检测。

注:(1)当阳性对照/阴性对照OD值≥5时,试验结果有效;(2)阴性对照OD值小于0.05时,按0.05计算;大于0.05时,按实际值计算。

[质量控制]为确保测试结果准确可靠,每批测试均应放置阴阳性质控血清与被检样品同时测试,用以检查试剂性能。

[注意事项]

1、不同批号的试剂不可混用。

2、试剂盒用前先平衡至室温。含血球的标本易出现假阳性,应避免使用。

3、未用完的板条应及时封存于易封袋中。

4、滴加试剂前,应将滴瓶翻转数次混匀。滴加时瓶身应保持垂直。

5、试剂盒置于2-8℃贮存,有效期6个月6、本试剂应视为有传染性物质,请按传染病实验室规程操作。

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