方法名称： 山楂叶—总黄酮的测定—分光光度法医`学教育网搜集整理。

应用范围： 本方法采用分光光度法测定山楂叶中总黄酮（以无水芦丁计算）的含量。

本方法适用于蔷薇科植物山里红Crataegus pinnatifida Bge.var.major 或山楂Crataegus pinnatifida Bge.的干燥叶。

方法原理： 本品细粉置于索氏提取器中，依次加入三氯甲烷和甲醇提取，蒸干，加稀乙醇溶解，滤过，续滤液中依次加入水、5%亚硝酸钠溶液、10%硝酸铝溶液、氢氧化钠试液一定量，摇匀，放置，立即置紫外可见分光光度计, 于波长500nm处测定吸光度，以无水芦丁（C27H30O16）计算总黄酮含量。

试剂：

1. 三氯甲烷

2 .5%亚硝酸钠溶液

3 .10%硝酸铝溶液

4.氢氧化钠试液

仪器设备： 1. 紫外-可见分光光度计

2. 索氏提取器

试样制备：

 对照品溶液的制备

精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品25mg，置50mL量瓶中，加乙醇适量，超声处理使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀。精密量取20mL，置50mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，制成每1 mL中含无水芦丁0.2mg的溶液。

操作步骤：

 1. 标准曲线的绘制

精密量取对照品溶液1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL、6 mL，分别置25 mL量瓶中，各加水至6 mL，加5%亚硝酸钠溶液1 mL，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1 mL，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10 mL，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应试剂为空白，立即照分光光度法，在500nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

2. 供试品的测定

取本品细粉1g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流提取至提取液无色，弃去三氯甲烷液，药渣挥去三氯甲烷，加甲醇继续提取至无色（约4小时），提取液蒸干，残渣加稀乙醇溶解，转移至50 mL量瓶中，加稀乙醇至刻度，摇匀，作为供试品储备液。取供试品储备液，滤过，精密量取续滤液5 mL，置25 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取2mL，置25mL量瓶中，加水至6 mL，加5%亚硝酸钠溶液1 mL，摇匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1 mL，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10 mL，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应试剂为空白，立即照分光光度法，在500nm波长处测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中无水芦丁的重量，计算。