方法名称： 左金丸—吴茱萸次碱的测定—高效液相色谱法

应用范围： 本方法采用高效液相色谱法测定左金丸中吴茱萸次碱的含量。

本方法适用于中成药制剂左金丸。

方法原理： 供试品于锥形瓶中，加乙醇溶解，超声提取。提取液过滤后进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长345nm处检测吴茱萸次碱的吸收值，计算出其含量。

试剂： 1. 甲醇

2. 乙醇

3. 乙腈

仪器设备： 1 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

Intersil C18色谱分析柱（4.6mm ID×250mm, 粒径5um），理论板数为2100。

1.3 紫外吸收检测器

2 色谱条件

2.1 流动相：乙腈 10%乙腈=50 50

2.2 检测波长：345nm

试样制备： 1.对照品溶液的制备

对照品贮备液为10ug/ml乙醇溶液。精密量取吴茱萸次碱对照品贮备液3ml，置25ml 量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，即得（每ml含吴茱萸次碱12ug）。

2. 供试品溶液的制备

取左金丸12g，研为细粉。取左金丸细粉0.7g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，加入精密量取的乙醇25ml，精密称定，水浴加热提取60min，放冷至室温，再精密称定，补足减失的溶剂，混匀，用0.45um滤膜滤过，即得。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

操作步骤： 1. 标准曲线的绘制

精密量取吴茱萸次碱对照品贮备液适量，用乙醇稀释成系列浓度(n=5)，分别取20ul 注入液相色谱仪，记录色谱峰面积，以峰面积均值X (n=3)对进样浓度Y (ug/ml) 线性回归，得回归方程。

2. 供试品的测定

分别精密吸取上述供试品溶液20μL注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长345nm处测定吴茱萸次碱的吸收值，计算出其含量。

参考文献： 潘敏翔，刘昌叶，常华，赵淼，姜韧。HPLC测定左金丸中吴茱萸次碱含量，药物实践杂志，2002，20(4)：236-237．