方法名称： 荷丹片－荷叶碱的测定－高效液相色谱法

应用范围： 本方法采用高效液相色谱法测定荷丹片中荷叶碱的含量。

本方法适用于中成药荷丹片。

方法原理： 本品加三氯甲烷加热回流，提取液蒸干，残渣加甲醇溶解，滤过，取续滤液进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长270nm处检测荷叶碱的吸收值，计算出其含量。

试剂： 1. 三氯甲烷

2 .乙腈

3 .三乙胺

4 .冰醋酸

5 .浓氨试液

仪器设备： 1 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论塔板数按荷叶碱计算应不低于2000。

1.3 紫外吸收检测器

2色谱条件

2.1流动相：乙腈 三乙胺 冰醋酸 水=27 1.8 0.78 70.6

2.2检测波长：270nm

2.3柱温：室温

试样制备： 1. 称取供试品

取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取约0.4g，精密称定，为供试品。

2. 对照品溶液的制备

精密称取荷叶碱对照品适量，加乙醇制成每1mL含16mg的溶液。

3. 供试品溶液的制备

取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取约0.4g，精密称定，用浓氨试液5mL湿润，加三氯甲烷60mL，加热回流3小时，放冷，移至分液漏斗中，分取三氯甲烷层，余留物再用三氯甲烷25mL分3次振摇提取，合并三氯甲烷液，回收三氯甲烷至干，残渣用乙醇溶解，转移至10mL量瓶中，加乙醇至刻度，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

操作步骤： 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20mL，注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器于波长270nm处测定荷叶碱（C19H21NO3）的峰面积，计算出其含量。

参考文献： 中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005版，一部，p554。