方法名称：

复方黄连素片－盐酸小檗碱的测定－高效液相色谱法

应用范围：

该方法采用高效液相色谱法测定复方黄连素片中盐酸小檗碱的含量。

该方法适用于中成药复方黄连素片。

方法原理：

供试品细粉溶于沸水中，加盐酸处理，上清液用流动相稀释，进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长265nm处检测盐酸小檗碱的峰面积，计算出其含量。

试剂：

1.乙腈

2.稀盐酸 取盐酸234mL，加水稀释至1000mL

3. 磷酸二氢钾溶液，0.033mol/L

仪器设备：

1 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000。

1.3 紫外吸收检测器

2 色谱条件

2.1 流动相：乙腈 0.033mol/L磷酸二氢钾溶液 = 40 60

2.2 检测波长：265nm

2.3 柱温：室温

试样制备：

1.称取供试品

取该品20片，除去糖衣，精密称定，求出平均片重，研细，精密称取总重量的1/20，为供试品。

2.对照品溶液的制备

精密称取在100°C干燥的盐酸小檗碱对照品约25mg，置250ml烧杯中，加沸水约150ml使溶解，稍冷后加入稀盐酸3ml，搅匀，放冷，转移至250ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取2ml，用流动相稀释至刻度，摇匀（每1mL含盐酸小檗碱0.008mg）。

3，供试品溶液的制备

供试品置250ml烧杯中，加沸水约150ml使溶解，稍冷后加入稀盐酸3ml，搅匀，放冷，转移至250ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，离心（每分钟转速位4000转），精密量取上清液2ml，置25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

操作步骤：

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10mL，注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器于波长265nm处测定盐酸小檗碱（C20H17NO4 · HCl）的峰面积，计算出其含量。

参考文献：

中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005版，一部，p534。