方法名称：

复方甘草片—吗啡、罂栗果提取物和罂栗果提取物粉的测定—高效液相色谱法

应用范围：

该方法采用高效液相色谱法测定复方甘草片中吗啡、罂栗果提取物和罂栗果提取物粉的含量。

该方法适用于复方甘草片。

方法原理：

供试品经固相萃取柱分离后，收集的部分进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长220nm处检测吗啡、罂栗果提取物和罂栗果提取物粉的吸收值，计算出其含量。

试剂：

1. 乙腈

2. 0.05mol/L磷酸二氢钾溶液

3. 0.0025mol/L庚烷磺酸钠溶液

4. 甲醇

仪器设备：

1. 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论塔板数按吗啡计算不低于1000。

1.3 紫外吸收检测器

2. 色谱条件

2.1 流动相：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液 0.0025mol/L庚烷磺酸钠溶液 乙腈=5 5 2

2.2 检测波长：220nm

2.3 柱温：室温

3. 固相萃取柱：用十八烷基硅烷健合硅胶为填充物。

试样制备：

1. 称取供试品

吗啡：取该品20片，精密称定，研细，精密称取约10片的量。

罂栗果提取物：取该品约10g，研成粗粉（过80目筛），精密称取1g，置200mL量瓶中。

2. 对照品溶液的制备

吗啡：精密称取吗啡对照品适量，用含有2%甲醇的5%醋酸溶液溶解并制成每1mL约含吗啡0.01 mg的溶液。

罂栗果提取物：取吗啡对照品适量，精密称定，用含有10%甲醇的5%醋酸溶液溶解并制成每1mL约含吗啡0.05 mg的溶液。

罂栗果提取物粉：精密称取吗啡、磷酸可待因对照品适量，用含有10%甲醇的5%醋酸溶液溶解并制成每1mL约含吗啡0.05mg和磷酸可待因0.025mg的溶液。

3. 供试品溶液的制备

吗啡：取固相萃取柱一支，依次用甲醇-水（3：1）15mL与水5mL冲洗，再用pH值约为9的氨水溶液（取水适量，滴加氨试液至pH值为9）冲洗至流出液pH值约为9，待用。将上述供试品置磨口锥形瓶中超声处理5分钟，精密加稀盐酸（6→10）10mL，摇匀，超声处理20分钟使吗啡溶解，取出，放置室温，滤过；精密量取续滤液1.0mL，至上述固相柱上，滴加氨试液适量使柱内溶液的pH值约为9（上样前另取同体积的续滤液预先调试，以确定滴加氨试液的量），摇匀，待溶剂滴尽后，用水20mL冲洗，用含2%甲醇的5%醋酸溶液洗脱，用5mL量瓶收集洗脱液至刻度，摇匀，即得。

罂栗果提取物和罂栗果提取物粉：取固相萃取柱一支，依次用甲醇-水（3：1）15mL与水5mL冲洗，再用pH值约为9的氨水溶液（取水适量，滴加氨试液至pH值为9）冲洗至流出液pH值约为9，待用。将上述供试品加5%醋酸溶液适量，超声处理30分钟使吗啡溶解，取出，放置室温，用5%醋酸溶液稀释至刻度，摇匀，滤过；精密量取续滤液0.5mL，至上述固相柱上，滴加氨试液适量使柱内溶液的pH值约为9（上样前另取同体积的续滤液预先调试，以确定滴加氨试液的量），摇匀，待溶剂滴尽后，用水20mL冲洗，用含10%甲醇的5%醋酸溶液洗脱，用5mL量瓶收集洗脱液至刻度，摇匀，即得。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

操作步骤：

分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10μL 注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长220nm处测定吗啡的吸收值，计算出其含量。