1.试验方法将分离的反应细胞（通常是患者的淋巴细胞）与刺激细胞（通常是供者或已知的标准淋巴细胞）配制成1×106/ml浓度的悬液，各加0.2ml到反应管中；放置37℃和5％CO2环境下培养5～6天。培养结束后进行涂片染色，观察并计数转化的淋巴细胞；也可在培养结束前5～12小时加入3H-TdR，收获后用液体闪烁仪计数细胞的放射性。试验结果的常用表示方式是刺激指数（SI）。
MLC分为双向法和单向法。双向MLC是反应管中两种细胞都有应答能力，可以互为刺激细胞和反应细胞，试验结果是两种细胞反应之和。
SI＝2×试验管cpm/（A对照cpm＋B对照cpm）
双向MLC只能反映两种细胞间LD的差别，结果比较模糊，也不能做LD抗原的分型。单向MLC是将刺激细胞用丝裂霉素C（mitomycinC）或X线照射先行灭活，但细胞的抗原性保持不变，因此可作为刺激细胞而不能作为反应细胞，试验结果是待检测细胞的反应，使于结果分析。
SI＝试验管cpm/自身对照cpm
单向MLC可以用来进行HLD-D和DP位点的分型试验，常用的方法有两类：医|学教育网搜集整理纯合子分型细胞（homozygoustypingcell，HTC）试验和预敏淋巴细胞分型（primedlymphocytetyping，PLT）试验。
2.HTC试验HTC是指细胞内一对同源染色体上两个HLA单倍型完全相同，所以该位点在细胞表面只表达一种抗原；HTC可从近亲婚配的子代表中寻找。将一组HTC经处理来活后作为刺激细胞，与待检细胞做单向MLC.如果待检细胞与刺激细胞的LD不同，就会发生反应；如果相同便不反应；所以试验又称为阴性分型法。当SI≤2时可认为待检细胞与该管HTC的LD抗原相同。本法的缺点是HTC难以得到，而且培养时间长（5～6天），在尸体器官移植时不能应用。
