材料与方法
1.1、实验动物刚断乳的SD大鼠,体重60~70g,清洁级,雌雄各半,动物及普通饲料均由吉林大学实验动物中心提供。
1.2、实验药物防风通圣丸[江苏平光信谊(焦作)有限公司生产,批号:070202,规格:5g/袋],芦荟减肥茶(广州权威保健品有限公司生产,批号:20061108,规格:6g/袋),使用前配置成5%溶液。
1.3、主要仪器电子天平(型号:BS600,上海友声衡器有限公司制造),自动平衡离心机(型号:LD24-0.8,北京医用离心机厂制造),全自动生化分析仪(型号:7060,日本制造)。
1.4、主要试剂甘油三酯(批号:070181),胆固醇(批号:0700271),血糖(批号:070456),以上试剂均购自北京中生北控生物科技股份有限公司。方法:葡萄糖氧化酶法。
1.5、大鼠营养性肥胖模型的制备及给药方法取SD大鼠80只,随机两组,正常对照组(n=12),饲喂普通饲料;其余大鼠为肥胖模型组,饲喂高脂饲料[3~5]。高脂饲料的组成:普通饲料55%,猪油12%,蔗糖5%,奶粉8%,花生5%,鸡蛋10%,麻油3%,食盐2%,浓鱼肝油100滴(含维生素A1.7×105u、维生素D1.7×104u),每天饲喂适量的新鲜黄豆芽。8周后将造模成功的动物随机分5组(n=10),分组给药,模型对照组(5ml生理盐水)、阳性对照组(给予芦荟减肥茶60mg/kg)、高剂量组(防风通圣丸500mg/kg)、中剂量组(防风通圣丸350mg/kg)、低剂量组(防风通圣丸200mg/kg)。灌胃给药,每天1次,连续6周。
1.6、观察指标
(1.6.1)体重和Lee's指数每周测1次体重及体长,并且计算Lee's指数。Lee's指数=体重(g)1/3×103/体长(cm)。(体长:从大鼠鼻尖到肛门的长度)。
(1.6.2)血清指标的测定分离血清,测定甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和血糖。
(1.6.3)体脂湿重剖腹取出大鼠体内脂肪(腹腔内脂肪、睾丸、子宫及肾周围脂肪垫),称其湿重。
(1.6.4)脂肪细胞大小在剥离出的脂肪组织中取一小块,用10%甲醛固定,石蜡包埋切片,HE染色,酒精梯度脱水,在400倍显微镜下计数全视野中脂肪细胞数,并用测微器测脂肪细胞大小。每张切片计数10个视野的细胞数、测量10个细胞的直径,取平均值作为每例的数值。
(1.6.5)统计分析数据用均数±标准差(x±s)表示,组间比较采用t检验。
结果
(2.1)对大鼠体重的影响造模8周后,模型对照组与正常对照组比较大鼠体重、体内脂肪、Lee's指数均有显著增加(P<0.01),见表1。防风通圣丸灌胃给药后能使肥胖动物的体重、脂肪重量和Lee's指数均显著下降,且随着剂量的增大,作用增强,呈现一定的量效关系。表1肥胖高脂饲料对大鼠体重的影响注:与正常对照组比较:##P<0.01,#P<0.05。防风通圣丸灌胃给药对营养性肥胖大鼠的影响注:与模型对照组比较:**P<0.01,*P<0.05。
(2.2)防风通圣丸灌胃给药对大鼠脂肪细胞大小的影响400倍镜下,模型对照组大鼠脂肪细胞明显增大,镜下脂肪细胞数减少,提示其脂肪细胞内脂肪堆积;给药组单个视野脂肪细胞变小,脂肪细胞数量多于模型对照组,细胞直径分别小于模型对照组,镜下脂肪细胞数增多,差异有显著性,以防风通圣丸高剂量组作用最显著。防风通圣丸对肥胖大鼠脂肪细胞形态的影响注:与模型对照组比较,**P<0.01,*P<0.05。
(2.3)防风通圣丸灌胃给药对模型大鼠血清指标的影响由表4可以看出,给药后,肥胖动物的血脂、甘油三脂和血糖均有所降低,其中与模型对照组相比,血糖明显下降(P<0.01),差异有显著统计学意义,血脂、甘油三脂与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。
(2.4)防风通圣丸灌胃给药对模型大鼠肝、肾功能的影响由表5可以看出,该药对动物的肝、肾的功能无明显的不良影响。表4防风通圣丸对肥胖大鼠体重TC、TG、血糖的影响注:与模型对照组比较,防风通圣丸对肥胖大鼠肝、肾功能的影响注:与模型对照组比较。
(2.5)防风通圣丸灌胃给药对动脉粥样硬化面积的影响经研究发现,本药对动脉硬化无缩小面积的作用。
讨论
单纯性肥胖症指体内脂肪堆积过多和(或)分布异常、体重增加,是遗传因素和环境因素共同作用的结果[6~9],且随着年龄增加,常伴有高血压、高血脂等,而高血脂又易引起血栓和动脉硬化等并发症。中药减肥因长期服用副作小、疗效肯定,越来越受到肥胖症求美者的青睐。防风通圣丸是金元时期医学家刘元素所创名方,由防风、川芎、当归、芍药、大黄、薄荷、麻黄、连翘、芒硝、生石膏、黄芩、桔梗、滑石、甘草、荆芥、白术、栀子等17味中药组成,具有解表通里、清热解毒的功效,主治外寒内热,表里俱实之证。方中防风、荆芥、石膏、黄芩等解表清热,大黄、芒硝攻下,当归、川芎等补血活血,一方面能促进体内物质的代谢、异化,另一方面能减少物质的吸收、同化,用于治疗高脂血症,能促进和提高脂质代谢水平,改善和调节脂质代谢与紊乱。20世纪80年代,日本学者应用此方治疗4例肥胖症患者,体重减轻l0%,认为其有能发汗通便,加速新陈代谢产物排泄及脂肪排除的功效,并推断该方减肥机制可能主要是对脂肪的分解作用,而对蛋白质的影响较小。现代研究证明,防风通圣丸减肥的作用机制之一是通过活化棕色脂肪组织(BAT)而引起体重的减轻。认为可能主要是抑制了外源性胆固醇的吸收所致,与临床上肥胖症除了遗传因素之外,过多摄食动物性脂肪是其高胆固醇血症形成的主要原因之一有很重要的实际意义。本组30只单纯性肥胖动物经防风通圣丸治疗2个月,其体重、体内脂肪、TC、TG、血糖,均有明显降低,尤其在血糖方面,作用显著,且对肝肾功能影响较小,不良反应较少。该药有市售丸剂,服用方便,可作为肥胖求美者推荐用药,有治疗、预防保健的双重作用。