照高效液相色谱法（附录ⅤD）测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.05mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）-甲醇（90：10）为流动相；检测波长为275nm。理论板数按胸腺五肽峰计算不应低于1200。
测定法取本品10瓶，分别加入流动相溶解并稀释制成每1ml中约含胸腺五肽0.5mg的溶液，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取经五氧化二磷干燥至恒重的胸腺五肽对照品适量，同法测定，按外标法以峰面积计算。
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