基因工程的基本原理是2013年临床执业医师考试的内容之一,医学教育网搜集整理了相关资料以便大家更好地复习。
完整的基因克隆过程大致分为六步:
1.(分)目的基因(外源基因)的获取 获取途径:①化学合成;②酶促合成cDNA;③制备的基因组DNA;④PCR技术。
2.(载)基因载体的选择与构建 基因载体具有自我复制能力,或兼有表达外源基因的能力。如质粒DNA、噬菌体DNA和病毒DNA等。
3.(接)外源基因与载体的连接 DNA的体外重组:将外源DNA与载体DNA连接在一起,形成重组DNA分子(嵌合DNA)。连接方式:①黏性末端连接;②平端连接;③人工接头连接。
4.(转)重组DNA导入宿主细胞 将重组DNA分子(含目的DNA)导入宿主细胞。使之随受体细胞生长、增殖,重组DNA分子得以复制、扩增。
5.(筛)重组体的筛选 筛选出带有目的基因的菌落或噬菌斑。
6.(表)克隆基因的表达 克隆基因表达为所需的蛋白产物。