测定酶的催化活性虽然是临床上最常用的方法，但由于酶的催化活性不仅决定于酶的含量，还受多种因素的影响，如所用底物的性质及浓度、反应介质的PH、温度、离子强度、激活或抑制因子等，因此具有方法依赖性。这是测定酶的催化活性存在的主要问题所在。因此对同一酶项目存在多种参考范围，各实验室间的结果缺乏可比性，室间质评用样本的靶值难以确定医学教育|网搜集整理，甚至有时会引起临床上的误诊。国内各临床实验室间测定，酶活性结果的差异较大，明显高于一般项目的测定结果。
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