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过氧化物酶染色实验原理

  过氧化物酶是广泛存在于生物体中的一类酶,大部分含有血红素,是一种结合蛋白。它可以催化H2O2或相关有机过氧化合物与有机、无机化合物的氧化反应。血细胞所含过氧化物酶主要为髓过氧化物酶(MPO),MPO是一类糖蛋白,是人类中性粒细胞含量最多的蛋白质,约占细胞干重的3%~5%.用MPOPHMPZE探针与正常人染色体中期细胞作原位杂交,证明MPO基因定位在染色体17q11~q22,为单拷贝基因。对HL60细胞系中MPO的生物合成和加工过程研究发现,最初产生的MPO是分子量为89,000的前体,有大、小亚单位各一个,对内糖苷酶敏感,无MPO活性,MPO前体还需进一步进入溶酶体,经蛋白切割后才能成熟并具有活性。这提示MPO前体转录时或转录后的加工缺陷可产生异常的MPO,使后者在早幼粒细胞发育过程中不能包装到嗜苯胺蓝颗粒中。医学|教育网搜集整理在临床白血病研究中,用全长MPOcDNA作探针进行RNA印迹法杂交,或用MPOcDNA探针作反转录聚合酶链反应(RT-PCR)或用原位杂交,证明AML表达MPOmRNA,但ALL无一表达MPOmRNA.在早期原始细胞尚无颗粒时可在核膜、内质网上发现其阳性物,此时在光镜下则难以识别出来,用电镜可观察到部分细胞显示阳性。髓过氧化物酶是嗜天青颗粒中一种溶酶体酶,主要存在于线粒体和溶酶体中,主其能是破坏生物氧化过程中有巨毒的过氧化物,使其放出氧,参加细胞内氧化还原过程,是一种与生物氧化有关的重要酶类。

  1985年血液学国际标准化委员会(ICSH)推荐三种方法:二氨基联苯胺法(DAB染色法);过氧化酶氨基-甲基卡巴唑染色法;二盐酸联苯胺法。二氨基联苯胺染色是常用的方法,细胞颗粒中的过氧化酶,能将过氧化氢中的氧释放出来,氧化二氨基联苯胺(DAB),形成金黄色沉淀而定位于过氧化酶活性的部位。

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