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牙龈卟啉菌内毒素化学组成和SDS-PAGE图谱分析

  牙龈卟啉菌脂多糖(porphyromonasgingivalislipopolysaccharide,Pg-LPS)具有内毒素活性,但其活性较大肠杆菌LPS(E.ColiLPS,E-LPS)弱[1,2]。我们经实验研究证明,脂肪酸组成的差异可能是Pg-LPS毒性较低的主要原因之一。

  一、材料与方法

  1.LPS的制备:应用酚水法、核酸酶消化和超离心法提取Pg47A-1株、E.coliO55B544336株和钩端螺旋体Leo株的LPS(LeptospiralLPS,L-LPS)。

  2.脂肪酸和单糖的分析:LPS经酸水解后释放的脂肪酸和单糖分别与硫酸-甲醇、乙酸酐反应,生成甲基酯和乙酸醛醇衍生物,用OV-17和SilarFCP柱分别进行脂肪酸和单糖的气相色谱分析。

  3.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE):采用垂直不连续板状电泳系统和银染色法分析各种LPS的SDS-PAGE图谱[3]。

  二、结果与讨论

  1.脂肪酸分析结果:Pg-LPS主要含羟基十五烷酸、羟基十七烷酸和羟基棕榈酸,E-LPS主要含羟基豆蔻酸、豆蔻酸和月桂酸(表1)。LPS的毒性主要取决于其所含脂肪酸的种类。Mcintire等曾证明,若从E-LPS中去除月桂酸(12∶0)、豆蔻酸(14∶0)和羟基豆蔻酸(3-OH-14∶0)或代以奇数碳原子脂肪酸,则LPS的内毒素活性明显下降。故认为脂肪酸组成的差异是导致Pg-LPS毒性较低的主要原因之一。

  2.单糖分析结果:Pg-LPS和E-LPS的单糖组成和含量相似,但E-LPS缺乏木糖(表2)。已有研究表明,LPS的Ⅰ型类脂A骨架为氨基葡萄双糖,Pg-LPS和E-LPS均有较高含量的氨基葡萄糖,故可以认为两者均为Ⅰ型类脂A的LPS。

  

  3.SDS-PAGE图谱:已有报道医学教育网搜集整理。

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