组织和细胞粗抗原的制备是临床检验技士考试大纲要求的考点，医学教育网做了整理，希望对大家有帮助。

免疫原多来源于只类及动物的组织或细胞，这些材料在取得可溶性蛋白质之前，必须先进行处理，以适合于进一步纯化。

1.组织细胞抗原的制备所用组织必须是新鲜的或低温（＜－40℃）保存的。

器官或组织得到后立即去除表面的包膜或结缔组织以及一些大血管。如有条件，脏器应进行灌注，除去血管内残留的血液。处理好的组织用0.05/NaN3生理盐水洗去血迹及污染物。将洗净的组织剪成小块，进行粉碎。粉碎的方法有两类：①高速组捣碎机法。操作时，将组织加盐水（约1/2）装入捣碎机筒内，用高速（约1000r/min）间断进行，每次30～60s，时间过长会产热。②研磨法。可用玻璃匀浆器或乳钵研磨。玻璃匀浆器是由一内壁经过磨砂的玻璃管和一根一端为圆柱状（表面亦经磨砂）的磨杆组成，主要经过旋转、压挤将组织粉粹。研磨法可用于韧性较大型组织，如皮肤、空腔器官等。为了更有效地磨碎组织，有时在研磨时加入淘洗过的海砂。组织匀浆通过2000～3000r/min离心10min后分成两个部分：沉淀物含有大量的组织细胞和碎片；上清液作为提取可溶性抗原的材料，提取前还要通过1000～2000r/min20～30min的高速离心，以除去微小的细胞碎片，此时上清液应澄清。

2.组织细胞或培养细胞可溶性抗原的制备制备抗原用的细胞包括正常细胞、病理细胞（如肿瘤细胞）或传代细胞。组织细胞的制备一般通过上述机械破碎后取得。或通过酶消化，所用的酶大多为胃蛋白酶或胰酶。通过酶解将细胞间质蛋白消化，获得游离的单个细胞。细胞抗原一般分为三个组分：膜蛋白抗原、细胞浆抗原（主要为细胞器）和细胞核及核膜抗原。三种抗原的制备皆需将细胞破碎，方法有如下几种。

（1）反复冻融法：将待破碎的细胞（有时为整块组织）置－20冰箱内冻结，然后缓慢地融化。如此反复2次，大部分组织细胞及细胞内的颗粒可被融破。

（2）冷热交替法：在细菌或病毒中提取蛋白质及核酸时可用此法。操作时，将材料投入沸水浴中，90℃左右维持数分钟，立即置于冰浴中使之迅速冷却，绝大部分细胞被破坏。

（3）超声破碎法：对微生物和组织细胞多用此法。处理效果与样品浓度和使用频率有关。一般组织细胞皆易破碎，而细菌，尤其是真菌的厚膜孢子则较难打破。超声波所使用的频率从1～20kHz不等。同样要间歇进行，因长时间超声也会产热，易导致抗原破坏。一次超声1～2min，总时间为10～15min.

（4）自溶法：利用组织和微生物的自身酶系，在一定的pH和温度下，使其细胞裂解。自溶的温度，对动物组织细胞常选0～4℃，而对微生物常选室温。自溶时常需加入少量防腐剂，如甲苯或氯仿等，NaN3不宜使用，因其能抑制酶的活力。

（5）溶菌酶处理法：在碱性条件下（pH8.0），溶菌酶可专一破坏细菌细胞壁，适用于多种微生物。除溶菌酶外，蜗牛酶、纤维素酶等也可用于消化细菌和组织细胞。

（6）表面活性剂处理法：常用的有十二烷基吡啶、支氧胆酸钠等。因效果较差，已少应用。

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