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放射免疫分析(RIA)是以放射性核素作示踪剂的标记免疫分析方法,它具有高度灵敏性、特异性和精确性等特点,特别适用于激素、多肽等含量微少物质的超微量分析。自20世纪50年代末首创以来,RIA被广泛地应用于生物医学的各个领域,极大地促进了相关学科的发展。
一、基本原理
经典RIA是采用标记抗原和非标记抗原竞争性结合有限量特异性抗体的反应。
二、实验方法及测定
RIA具体测定方法包括以下三个主要步骤:
(一)抗原抗体反应
根据RIA原理,将未标记抗原(标准品和待测样品)、标记抗原和特异性抗体加入反应试管中,在一定条件(温度、时间及介质pH)下进行竞争抑制反应。
(二)分离结合与游离标志物
RIA反应平衡后,标记抗原与试剂抗体形成免疫复合物(B)。由于其含量极少,不能自行沉淀,因此需加入适当的沉淀剂才能将其彻底沉淀,然后经离心使其与游离的标记抗原(F)分离。某些小分子抗原,也可采用吸附法分离B与F.
理想的分离方法应分离彻底、迅速;分离试剂和过程不影响反应平衡,而且效果不受反应介质因素的影响;操作应简单、重复性好以及经济。目前RIA常用的分离方法有以下几种:
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