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放射免疫分析的实验方法及测定是什么?

放射免疫分析的实验方法及测定是什么?为了帮助检验职称考生了解,医学教育网为大家整理如下:

(一)抗原抗体反应

将未标记抗原(标准品和待测样品)、标记抗原和特异性抗体加入反应试管中,在一定条件(温度、时间及介质pH)下进行竞争抑制反应。

先加待测样品(或标准品)和抗血清,使非标记抗原与抗体达到结合平衡,然后再加入标记抗原竞争与抗体结合。

(二)分离结合与游离标记物

RIA反应平衡后,标记抗原与试剂抗体形成免疫复合物(B)。由于其含量极少,不能自行沉淀,需加入适当的沉淀剂将其彻底沉淀,然后经离心使其与游离的标记抗原(F)分离。某些小分子抗原,也可采用吸附法分离B与F。

理想的分离方法应分离彻底、迅速;分离试剂和过程不影响反应平衡,而且效果不受反应介质因素的影响;操作应简单、重复性好以及经济。方法:

1.第二抗体沉淀法:反应完成后加入二抗形成复合沉淀。为增强效果可加入一定量的与一抗同种动物的血清或IgG,或是将二抗与某些颗粒固相物连接。

2.聚乙二醇(PEG)沉淀法:能非特异地沉淀抗原抗体复合物等大分子蛋白质,而不沉淀小分子抗原。当温度髙于30℃时,沉淀物易复溶。

3.PR试剂法 先将二抗与PEG按一定比例混合成悬液后进行试验。此法保留了二者的优点,节省了二者的用量,且分离迅速,简便。

4.活性炭吸附法:活性炭可吸附小分子游离抗原或半抗原,而大分子蛋白(如抗体和免疫复合物)则留在溶液中。

(三)放射性测量及数据处理

分离B、F后,可分别对二者进行测定。

绘制标准曲线(剂量-反应曲线),样品管以其测量或计算的反应参数,通过标准曲线即可查出相应的待检抗原浓度。

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