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当β细胞接受刺激后，β颗粒移向细胞膜，并在蛋白水解酶的作用下，使胰岛素原分解脱下一段含35个氨基酸残基（第31位至第65位氨基酸）的连接肽并进一步在其氨基端和羧基端分别切下精-赖、精-精两对氨基酸，形成含31个氨基酸的C肽，和以β链（30个氨基酸残基）C末端与α链N末端（21个氨基酸残体基）以两对二[医学教育网原创]硫键相连接构成的胰岛素。因此在分泌胰岛素的同时，总是有等克分子的C肽和少量的胰岛素原分泌。
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