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1.单个核细胞分离
Ficoll分离液是一种单次密度梯度离心分离法,主要用于分离外周血中单个核细胞(PBMC),包括淋巴细胞和单核细胞。其分布由上到下依次为:稀释的血浆层、单个核细胞层、粒细胞层和红细胞层。
2.淋巴细胞的分离
①分离原理:利用单核细胞能主动黏附在玻璃、塑料、尼龙毛、棉花纤维或葡聚糖凝胶的特性,从单个核细胞悬液中除去单核细胞,从而获得纯淋巴细胞群。
②除去单核细胞分离方法:黏附贴壁法、吸附柱过滤法、磁铁吸引法(吞噬特性)。
③Percoll分离法:是一种连续密度梯度离心分离法。Percoll液和PBS等量混合,经高速离心后可形成一个连续密度梯度,不同密度的细胞将悬浮于各自不同的密度区带,从而将密度不等的细胞分离纯化。
3.T细胞和B细胞的分离
①E花环沉降法:T细胞有绵羊红细胞受体(E受体/CD2受体)。
②EA花环沉降法:B细胞表面有lgG Fc受体,能与免疫球蛋白(lgG)的Fc段结合。
4.T细胞亚群的分离
原则:根据相应细胞的特性和不同表面标志。
●亲和板结合分离法:各种淋巴细胞亚群具有不同的抗原表位。
●磁性微球分离法
●荧光激活细胞分离仪分离法
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