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β-半乳糖苷酶试验的原理与方法

关于β-半乳糖苷酶试验的原理与方法,医学教育网小编专门整理如下,请各位参加检验主管技师资格考试的考生仔细查看。

(1)原理:有的细菌可产生β-半乳糖苷酶,能分解邻硝基酚β-D-半乳糖苷(ONPG),而生成黄色的-硝基酚(O-nitrophenol),在很低浓度下也可检出。

(2)试剂:0.75MONPG溶液:取80mg溶于15ml蒸馏水中,在加入缓冲液(6.9gNaH2PO4,溶于45ml蒸馏水中,用30%NaOH调整pH为7.0,再加水至50ml)5ml,置于4℃冰箱中保存。ONPG溶液为无色,如出现黄色,则不应再用。

(3)方法:从培养基上取菌,于0.25ml无菌生理盐水中制成菌悬液,加入一滴甲苯并充分振摇,使酶释放。将试管置37℃水浴5分钟,加入0.25mlONPG试剂,水浴20分钟~3小时观察结果。

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