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稀释法操作时需注意什么?

在进行微生物检验中的稀释法操作时,需要注意以下几个方面来确保实验结果的准确性和可靠性:
1. 无菌操作:整个稀释过程需要在无菌条件下进行,以避免外界微生物的污染。可以使用酒精灯或生物安全柜等设施创造局部无菌环境。
2. 稀释液的选择:根据待测样本及目标微生物的特点选择合适的稀释液,如生理盐水、磷酸缓冲液等,并确保所用稀释液是经过灭菌处理的。
3. 准确量取:使用微量移液器准确吸取所需体积的原液和稀释液。每次更换样品或不同浓度时都要更换新的枪头以防止交叉污染。
4. 混合均匀:将样本与稀释液充分混合,可采用涡旋振荡、轻弹管壁等方式使溶液混匀,避免形成沉淀物影响后续实验结果。
5. 稀释倍数记录:准确记录每次稀释的倍数及最终的有效浓度,以便于后续数据分析和结果解读。
6. 适当稀释范围:根据预估的目标微生物数量选择合适的起始稀释度,并逐步增加稀释倍数直至达到可计数范围内(一般为30-300个菌落形成单位)。
7. 平板制备与培养条件:将稀释后的样品均匀涂布于平板上,注意不要让液体溢出或造成污染。选择适合目标微生物生长的培养基和培养条件进行孵育。
8. 结果观察与记录:在规定时间内观察并记录每个平板上的菌落数量,计算原始样本中的微生物浓度。
9. 安全防护措施:操作过程中应穿戴适当的个人防护装备,如实验服、手套等,并遵守实验室安全规范。

通过以上这些注意事项的严格遵循,可以有效地提高稀释法测定结果的质量和准确性。
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