(1)、色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填料;甲醇-水(70:30)为流动相,检测波长为322nm,理论板数按蛇床子素峰计算,应不低于2500。对照品溶液的制备 精密称取蛇床子素对照品适量,加中性乙醇使溶解,并稀释,制成每1ml中含0.002mg的溶液,作为对照品溶液。(用前新配) 供试品溶液的制备 精密量取本品5ml,加氨水0.25ml(必要时加石英粉0.15g),混匀,置热水浴上浓缩至近干,加少量乙醇溶解并定量转移入10ml量瓶中,超声处理10分钟,放至室温,加乙醇稀释至刻度,摇匀,滤过,弃去初滤液,取续滤液作为供试品溶液。测定法,分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各10~20μl,注入液相色谱仪,测定峰面积,以外标法计算,即得。
(2)、取本品30ml,加浓氨溶液2ml,用乙醚-异丙醇(9:1)提取二次,每次25ml,合并提取液,挥干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。另取苦参碱对照品,加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典1995年版一部附录ⅥB)试验,吸取供试品溶液10μl,对照品溶液3μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以苯-丙酮-酯酸乙酯-浓氨溶液(2:3:4:0.2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。(3)、取本品50ml,用乙醚50ml振摇提取,静置,待分层,弃去乙醚层,收集水层,置水浴上挥去乙醚;再用水饱和的正丁醇50ml提取,充分振摇,静置分层,取正丁醇层在水浴上蒸干;弃去蒸发皿内上沿的油层,干残渣用小钢勺刮碎,并转移至另一容器中,加无水乙醇5ml使溶解,离心,上清液作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品,加乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典1995年版一部附录ⅥB)试验,吸取对照品溶液5μl,供试品溶液10μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G板上,以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水-十二烷基硫酸钠(5:3:1:1:158mg)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的一个黄色荧光斑点。
(4)、取[鉴别](3)项下的供试品溶液作为供试品溶液。另取栀子甙对照品,加乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典1995年版一部附录ⅥB)试验,吸取对照品溶液5μl,供试品溶液10μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上,以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5:3:1:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸乙醇(1→10)溶液,热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的紫褐色斑点。