免疫检测样本的制备及程序是临床执业医师考试须了解的内容,医学|教育网搜集整理了相关内容与考生分享,希望给予大家帮助!
流式细胞仪测定的标本,不论是外周血细胞、培养细胞或组织来源细胞,首先要保证是单细胞悬液,对不同来源的细胞制备成单细胞悬液有不同的处理程序。
(一)外周血淋巴细胞样品的制备
血和骨髓:天然单细胞悬液。当有血凝块时,应用50μm尼龙网过滤,同时进行细胞计数和血涂片以判断靶细胞群体是否仍然存在。一般采取密度梯度离心法。
(二)培养细胞的样品制备
贴壁生长的单层细胞需要用蛋白酶消化后用机械法分离。
(三)新鲜实体组织单细胞悬液的制备
一般采取机械法、酶处理法、化学试剂处理法和表面活性剂处理法等方法。分离不仅是要获得最大产量的单细胞悬液,还要尽量保证细胞结构的完整性和抗原性。大多数淋巴样组织可用轻柔的机械方法快速分离,并保持收获细胞的相对完整。某些组织由于细胞间连接紧密,需在机械分离的基础上用蛋白水解酶如胰蛋白酶、胃蛋白酶。骨髓标本亦可能因骨细胞成分污染而需要酶消化。但使用酶法一定要确认酶的使用没有改变、减弱靶抗原的表达,细胞活性没有显著降低。
(四)单细胞悬液的保存
常用的处理方法有三种:
1.深低温保存法。
2.乙醇或甲醇保存法。
3.甲醛或多聚甲醛固定法。