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免疫标记的技术

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免疫标记的技术:

1.免疫荧光

免疫荧光技术是用荧光素标记的抗体或(抗原)分子检测相对应的抗原或抗体分子的技术。

(1)直接荧光法:把荧光素标记的抗体与待检标本(细胞悬液、细胞涂片或组织切片)相互作用,洗去未结合荧光标记抗体,在荧光显微镜下观察,有荧光的部分为阳性。

(2)间接荧光法:将特异性抗体(一抗)和待检标本(细胞悬液、细胞涂片或组织切片)相互作用后加入荧光素标记的一抗的抗体(二抗)显示结果。

免疫荧光法在病原体的诊断、细胞表面标志的鉴定等方面用途广泛。流式细胞仪(FACS)是用于分离、鉴定荧光素标记单克隆抗体识别细胞的仪器。

2.放射免疫分析

根据竞争结合原理,应用放射性核素标记的抗原与相应的抗体(抗原)结合,通过抗原抗体复合物的放射性活性判断结果。

(1)液相法:将待检标本(含抗原)与定量的放射性核素标记的已知抗原和定量的特异抗体混合,经一定时间的作用后,分别测定免疫复合物和游离部分的放射性。根据用非标记抗原作成的标准曲线,可确定待检样品中相应抗原的含量。

(2)固定法

将吸附到固相载体表面的抗原与待检标本(含抗体)作用,然后加标记抗体。测定结合于固相载体的放射性,判定结果。

放射免疫分析法在激素、药物、抗体、维生素的测定等方面应用广泛。

3.酶免疫分析

(1)免疫酶染色:酶标抗体和抗原(如组织切片上的抗原)发生特异性结合后,加入酶底物。底物在酶的催化下生成有色的物质。

(2)酶联免疫吸附实验(ELISA)

①间接法:将已知的抗原包被在固相载体的表面,加入待检标本(含特异性抗体),再加入酶标记抗Ig抗体(第二抗体)。加底物显色,根据颜色的光密度判定标本中抗体的含量。

②夹心法:将已知的特异性抗体包被在固相载体表面,加入待检标本(含抗原),标本中的抗原和包被的抗体结合。冲洗后,加入该抗原的酶标抗体,加底物显色。根据颜色的光密度判定标本中抗原的含量。

(3)ELISPOT测定法:用某种细胞因子的抗体包被固相载体(如96孔板),加入待检细胞,经孵育后,如待检细胞分泌了细胞因子,这些因子被包被的抗体捕获。洗去细胞,加细胞因子特异性抗体。洗去未结合抗体。加底物显色后,可出现有颜色斑点。根据斑点的数量可判定细胞因子分泌细胞的数量,根据斑点的深浅,也可判定此细胞因子的相对含量。医学`教育网搜集整理

4.化学发光物质标记技术

是用化学发光物质(如鲁米诺)标记的抗原或抗体进行抗体或抗原检测的方法。其结果用发光光度计来检测。

5.免疫印迹试验

将抗原物质用聚丙烯酰胺凝胶电泳分带后转至硝酸纤维素膜上,用酶标或放射性核素标记的抗体识别和结合抗原,加底物显色或做放射自显影显示结果。该法能测定待检蛋白质的分子量和特异性。应用该法检测血清中的HIV抗体是确认HIV感染的方法。

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