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确诊有赖于分离到致病菌。在疾病早期取血、骨髓、脑脊液、受损皮肤粘膜及新生儿脐带残端医学教育|网搜集、羊水、喉及外耳道分泌物、粪、尿等作细菌培养，均可分离到致病菌。由于利斯特氏菌与葡萄球菌、链球菌（包括肺炎链球菌）等有相同的抗原，可引起交叉反应，故血清学反应对诊断帮助不大。
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