本章重点：

　　核酸分子杂交的定义。印渍技术的原理。探针技术。Southern、Northern和Western

　　blotting的原理和应用。PCR的工作原理、反应体系、基本反应步骤。人类基因组计划和后基因组研究的主要内容。

　　本章难点：

　　三大印渍技术的原理和操作步骤。PCR技术反应体系的建立和基本反应步骤。人类基因组分析机后基因组研究的主要内容。

　　一、分子杂交与印渍技术

　　要点：

　　1．分子杂交是建立印渍技术的理论基础。

　　2．印渍技术：首先由Southern提出。基本原理：将存在于凝胶中的生物大分子转移（印渍）于固定化介质上并加以检测分析的技术。转移方式：毛细法、电转移、真空吸引转移。

　　3．探针技术：用同位素、生物素或荧光染料标记一小段已知序列的多聚核苷酸的末端或全链，将其作为探针，与固定在膜上的DNA或RNA杂交，以检测膜上是否存在同源核酸分子。

　　4．印渍技术的类别和应用

　　（1）Southern blotting：①基本原理与操作：A限制性内切酶消化基因组DNA；B琼脂糖凝胶电泳；C变性；D将凝胶中的变性DNA区带转移到NC膜上；E封阻剂封闭非特异性位点；F加入探针杂交；G放射自显影或其它方法检测杂交区带。②应用：主要用于基因组DNA的分析。

　　（2）Northern blotting：基本原理与操作同Southern blotting

　　（3）Western blotting：

　　（4）其它：

　　基本概念：

　　1．核酸分子杂交：在DNA复性过程中，把不同的DNA单链分子放在同一溶液中，或把DNA与RNA放在一起，只要在DNA或RNA的单链分子之间存在着一定程度的碱基配对关系，就可以在不同的分子间形成杂化双链，这种现象称为核酸分子杂交。

　　基本要求：掌握核酸分子杂交的概念，三大印渍技术的原理、操作步骤与应用。了解其它印渍技术如原位杂交、斑点印渍、DNA芯片的特点与应用。

　　二、PCR技术

　　要点：

　　1．PCR的工作原理：

　　（1）基本原理：中文名称为聚合酶链反应，是一种DNA的体外扩增技术。其基本原理是以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板5’末端和3’末端相互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链合成目的DNA的过程。

　　（2）反应体系的基本成分：模板DNA、特异性引物、耐热性DNA聚合酶、dNTP、含镁离子的反应缓冲液。

　　（3）基本反应步骤：①变性：反应系统加热至95℃，使模板DNA双链解离。②退火：将温度下降至适宜位置，是引物与模板DNA退火结合；③延伸：温度上升至72℃，DNA聚合酶以dNTP为底物催化DNA的合成反应。

　　2．PCR的主要用途：①目的基因的克隆；②基因的体外突变；③DNA的微量分析。

　　基本要求：掌握PCR的基本原理、反应体系的组成及基本反应步骤。

　　三、核酸序列分析

　　两大方法：化学裂解法和DNA链末端合成终止法（Sanger法）。目前应用最广泛的是DNA链末端合成终止法，DNA自动测序亦是采用此法的主要原理。

　　基本要求：了解目前最常用的核酸序列分析方法是什么。

　　四、人类基因组计划与后基因组研究

　　1．人类基因组计划的主要内容：①遗传图分析；②物理图分析；③转录图分析；④基因组序列测定；⑤资料的储存与利用。

　　2．后基因组研究：①功能基因组学；②蛋白质组学。等。

　　基本要求：了解人类基因组计划与后基因组研究的主要内容。