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免疫电泳技术知识总结-检验主管技师辅导

免疫电泳技术是检验主管技师考试要涉及的知识点,医学教育网搜集整理了相关知识点总结,希望对考生有帮助!

一、对流免疫电泳

对流免疫电泳试验是以琼脂或琼脂糖凝胶为基质的一种快速医学教|育网搜集整理,敏感的电泳技术。既可用已知抗原检测抗体,又可用已知抗体检测抗原。反应结果可信度高,适用范围广。以本法为基础改进的技术有酶标记抗原对流免疫电泳和放射对流免疫电泳自显影等技术。二者克服了电泳技术本身不够灵敏的弱点。

二、火箭免疫电泳

(1)原理:火箭免疫电泳是将单向免疫扩散和电泳相结合的技术。抗原在电场作用下,在含有适量抗体的琼脂糖凝胶中向正极泳动,逐渐形成梯度浓度,在抗原抗体比例适当时形成沉淀,随着抗原量的减少,沉淀带越来越窄,形成火箭峰样沉淀,峰形高低与抗原量呈正相关医`学教育网搜集整理。用已知量标准抗原作对照,绘制标准曲线,根据检测样品沉淀峰的高度可算出待测抗原的含量。

(2)主要用途:

①抗原蛋白定量,如IgA、IgG、IgM和sIgA检测;

②C3、C4及其裂解产物检测;

③AFP等检测。

三、免疫电泳

免疫电泳是将区带电泳和免疫扩散结合起来的一种免疫学分析法。血清标本先经区带电泳将各种蛋白成分分离开,继而用各种特异性抗血清进行免疫扩散,根据M蛋白在免疫电泳中所形成的特殊沉淀弧,观察其电泳转移位置与抗原特异性,可将M蛋白的免疫球蛋白类型和其轻链型加以鉴定。IFP还不能完全进行M蛋白分类时,可用免疫固定电泳做补充鉴定医|学教育网搜集整理。

注意:

①Ag与Ab比例要适当;

②用游离轻链分析时,由于其分子量小,扩散快,故每隔10分钟观察一次结果;

③有时M蛋白(IgA或IgM)的四级结构会影响轻链抗原决定簇与相应抗体结合,轻链不易检出,易误诊为重链病,因此,在血清中加入2~疏基乙醇(10μl/ml)作还原处理后,再作试验观察结果。

四、免疫固定电泳

免疫固定电泳技术(IFE)是一种包括琼脂凝胶蛋白电泳和免疫沉淀两个过程的操作。检测标本可以是血清、尿液、脑脊液或其它体液。免疫固定电泳技术(IFE)已在医学研究、法医学、基因诊断和临床实验室操作中得到了广泛的应用。临床主要应用如下疾病的诊断和疗效观察:

1、单克隆免疫球蛋白增殖病:是以单一克隆的浆细胞过度增高为特征,常常导致某种免疫球蛋白或免疫球蛋白亚单位大量合成而其他正常免疫球蛋白水平下降。免疫化学方法能够对异常蛋白定量,而电泳分析能够确定这些蛋白质的单克隆属性。

2、本周氏蛋白和游离轻链病:本周氏蛋白是没有与免疫球蛋白分子中重链结合的单克隆κ或λ轻链。免疫固定电泳来确定本周氏蛋白的存在形式。轻链病是指仅产生κ或λ单克隆轻链,在尿中称为本周氏蛋白的疾病,轻链病包括10%-15%的单克隆免疫球蛋白病,它多出现在IgG骨髓瘤(60%)和IgA骨髓瘤(16%)病中。

3、重链病:是以免疫球蛋白重链部分存在的单克隆蛋白为特征。

4、多克隆免疫球蛋白病:主要为γ蛋白区宽的条带,多见于炎症或感染和胶原病。

5、肾脏病变的来源分析:尿免疫蛋白电泳可以很好地协助临床判断肾脏的主要损伤(肾小球和肾小管)及尿蛋白选择程度的估计,选择性和非选择性蛋白尿。指导治疗和判断预后有价值。

五、交叉免疫电泳

用琼脂糖作支持物,先将抗原经电泳展开,然后在同一玻板上浇注含抗体的琼脂糖凝胶,在后一个凝胶中进行第二次电泳(与第一次电泳方向垂直)。这种方法实际上是在凝胶电泳后进行免疫电扩散。不同抗原形成互相独立的峰状免疫沉淀,至最适抗原/抗体比值处停止运动,沉淀峰的高度和面积与抗原量成比例关系。用此法可进行各种抗原的定量测定。

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