生物素(biotin,B)广泛分布于动、植物组织中,常从含量较高的卵黄和肝组织中提取,分子量244.31kD.
一、活化生物素
利用生物素的羧基加以化学修饰可制成各种活性基团的衍生物,称为活化生物素。生物素活化后,可容易地与各种抗原、抗体、酶及核酸分子中相应基团偶联形成生物素化标志物。几种常用于标记不同类型生物大分子的活化生物素的制备及特性。
(一)标记蛋白质氨基的活化生物素
(二)标记蛋白质醛基的活化生物素用于此类标记的活化生物素有两种:生物素酰肼(BHZ)和肼化生物胞素(BGHZ)。
(三)标记蛋白质巯基的活化生物素
3-(N-马来酰亚胺-丙酰)-生物胞素(MPB)是能特异地与蛋白质巯基结合的活化生物素试剂。
(四)标记核酸的活化生物素
活化生物素可通过缺口移位法、化学偶联法、光化学法及末端标记法等技术使生物素的戊酸侧链通过酰胺键与核酸分子相连,构成生物素标记的核酸探针。常用于标记核酸分子的活化生物素有以下几种:
1.光敏生物素它是一种化学合成的生物素衍生物,用于DNA或RNA的标记医`学教育网搜集整理。
2.生物素脱氧核苷三磷酸先将生物素与某种脱氧核苷酸连接成活化生物素。可采用缺口移位法掺入到双链DNA中。
3.BNHS和BHZ二者均可以在一定条件下与核酸胞嘧啶分子中的N-4氨基交联,使核酸分子生物素化。
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