荧光分析法

一、基本原理

荧光的产生：此化学物质能从外界吸收并储存能量（如光能、化学能等）而进入激发态，当其从激发态再回复到基态时，过剩的能量可以电磁辐射的形式放射（即发光）。荧光发射的特点是：可产生荧光的分子或原子在接受能量后即刻引起发光；而一旦停止供能，发光（荧光）现象也随之在瞬间内消失。

发射荧光的光量子数亦即荧光强度，除受激发光强度影响外，也与激发光的波长有关。各个荧光分子有其特定的吸收光谱和发射光谱（荧光光谱），即在某一特定波长处有最大吸收峰和最大发射峰。选择激发光波长量接近于荧光分子的最大吸收峰

物质的激发光谱和荧光发射光谱，可以用作该物质的定性分析。当激发光强度、波长、所用溶剂及温度等条件固定时，物质在一定浓度范围内，其发射光强度与溶液中该物质的浓度成正比关系，可以用作定量分析。荧光分析法的灵敏度一般较紫外分光光度法或比色法为高，浓度太大的溶液会有“自熄灭”作用医学教育网`搜集整理，故荧光分析法应在低浓度溶液中进行。

二、荧光分光光度计

激发光源→激发光单色器→样品池

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发射光单色器→检测器→数据记录处理

样品池用低荧光材料制成，四面透光，发射光方向与激发光成直角。

三、应用

荧光分析可用于鉴别和含量测定。一般采用对照品比较法测定含量，灵敏度高、选择性好，但干扰多、线性范围窄，多用于需要高灵敏度和允许较大变异性的样品分析。