特异性IgM抗体测定

　　脊髓灰质炎病毒感染机体，IgM抗体的免疫应答反应最早在感染后10～15d即可被捕捉ELISA法检测到。一般持续一个月后消失。在疑似脊髓灰质炎病人血液中，尤其是脑脊液中查到IgM抗体有助于本病的诊断，由于方法简便，而且可以分型诊断，一般在2d内即可得到结果，故是一种早期快速特异诊断的方法。早期确诊有利于争取时间采取防治应急措施。但目前所测的IgM抗体不能区别疫苗株和野毒株，故IgM阳性的意义，只有在明确近期无服苗的情况下才能应用。但从脑脊液中查到特异性IgM抗体，如血脑屏障正常，则即可结合病史诊断为疫苗相关病例或为野毒病例。在AFP病人因故未收集到合格的粪便标本如在麻痹一月内血液IgM抗体阴性有助于排除诊断。

　　B1 捕捉法ELIsA法检测IgM抗体

　　B1.1 加0.1mL抗人IgMμ链抗体于塑料微孔板，37℃过夜。

　　B1.2 倒掉液体，不洗，用10％牛血清的0.05％吐温（Tween－20）生理盐水0.2mL封闭每孔，放于37℃。

　　B1.3 1h后倒去上述牛血清封闭液加1∶100稀释的待测病人血清（或1：2稀释的待测病人脑脊液），37C作用1.5～2h。

　　B1.4 倒出待测血清（或脑脊液），用0.05％吐温生理盐水液洗三次，然后分别于上述孔内分别加已知1型、2型和3型的脊髓灰质炎抗原，每型加2孔，每孔0.1mL，置4℃过夜。

　　B1.5 吸出抗原，洗3次后，各相应孔加已知对应的抗血清（即加1型病毒抗原孔加1型抗血清，2型抗原孔加2型血清……）0.1mL。

　　B1.6 37℃1～1.5h后倒去抗体，洗三次后各加酶标抗抗体0.1mL。

　　B1.7 37℃结合1～1.5h后倒出酶标抗体，用洗液洗三次，加邻苯二胺底物（上标始）1（上标终）），每孔0.1mL。

　　B1.8 避光作用5～15min。

　　B1.9 待加正常细胞为对照抗原的孔，即将显色之时各孔立即加0.05mL2mol/L硫酸终止反应。

　　B1.10 在490mm光源下测定OD值。

　　B1.11 结果的判断

　　1型抗原孔阳性即为1型IgM阳性；

　　2型抗原孔阳性即为2型IgM阳性，余类推。

　　1）邻苯二胺底物的配制为10mLpH5.0柠檬酸磷酸缓冲液中加邻苯二胺4mg再加30％过氧化氢5μL。

　　2）空白对照即为抗μ链抗体包被孔加邻苯二胺底物加硫酸的对照。